蓝莓叶多酚组成及其抗食源性致病菌活性分析

张添菊 1,2,王 帆 2,李春阳 2,*,周 涛 1,*

(1.南京师范大学金陵女子学院,江苏 南京 210097;2.江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏 南京 210014)

摘 要:利用高效液相色谱-二级质谱对蓝莓叶多酚组成进行研究,发现蓝莓叶多酚含有槲皮素-3-O-戊糖苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、对香豆酰奎尼酸及B型原花青素二聚体等多种酚类物质;通过对6 种常见食源性致病菌的抗菌效果研究,发现蓝莓叶多酚具有广谱抗菌性,对鲍氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌和枯草芽孢杆菌具有较好的抑制效果,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,革兰氏阳性(G ))和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,革兰氏阴性(G ))最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)<9.30 mg/mL,对其他菌株的MIC<4.65 mg/mL,抑菌活性由强到弱为:金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>单增李斯特菌>鲍氏志贺氏菌>肠炎沙门氏菌>枯草芽孢杆菌。结果表明:蓝莓叶多酚含有较多生物活性组分,抑菌性强且抑菌谱广泛,可以开发为新型天然防腐剂。

关键词:蓝莓叶多酚;组成分析;高效液相色谱-二级质谱;抑菌活性

蓝莓又称越桔或蓝浆果,杜鹃花科越桔属常绿灌木,主要有矮丛蓝莓、高丛蓝莓以及兔眼蓝莓3 种大型种植类型 [1]。蓝莓叶中多酚含量丰富且成分复杂,主要有咖啡酸、咖啡酰奎宁酸、槲皮素、槲皮素糖苷、儿茶素、表儿茶素以及低聚原花青素等活性物质 [2-4],然而在蓝莓加工中,蓝莓叶通常被当作废物丢弃,造成巨大的资源浪费。Ehlenfeldt等 [5]从87 种高丛蓝莓的果实和叶子中分别检测其多酚含量,结果发现蓝莓叶中多酚的平均含量比果实中高30 倍左右。Turhan等 [6]的研究也证实了蓝莓果中多酚含量显著低于蓝莓叶,且蓝莓叶的抗氧化活性及清除自由基能力均强于蓝莓果实。

蓝莓叶酚类化合物具有很强的抗菌活性,可以开发成为新型植物源抗菌剂。周志娥等 [7]研究发现,绿原酸、异绿原酸A能有效抑制大肠杆菌微生物的生长,主要机制是破坏大肠杆菌的细胞壁、细胞膜结构,促使细胞通透性增加,内容物渗透到细胞外,从而导致细胞凋亡。郭艳华等 [8]研究表明,槲皮素及其配合物能有效抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及啤酒酵母,同时发现其配合物抑菌稳定性明显优于槲皮素。蓝莓叶多酚还具有抗癌、抗衰老、提高自身免疫力、抗炎症、防止心血管疾病等生物活性 [9],可用于食品加工与贮藏保鲜。

本实验以南京地区“兔眼”蓝莓(灿烂)为研究对象,主要考察了蓝莓叶的多酚组成及其对常见食源性致病菌的抑菌活性,为蓝莓叶资源的高效利用以及天然抗菌剂的开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

“兔眼”蓝莓(Vaccinium ashei reade)蓝莓叶 江苏省南京市溧水县傅家边农业观光科技园。

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,革兰氏阳性(G ))、大肠杆菌(Escherichia coli,革兰氏阴性(G ))、金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureus,G )、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,G )、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,G )、鲍氏志贺氏菌(Shigelta bogdii,G ) 江苏省农业科学院;营养肉汤培养基 广东环凯微生物科技有限公司;HPD200大孔树脂 沧州宝恩吸附材料科技有限公司;甲醇(色谱纯,下同)、乙酸 南京化学试剂股份有限公司;那他霉素、二甲基亚砜 南京寿德实验器材有限公司。

1.2 仪器与设备

LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌器 上海申安医疗器械厂;SW-CJ-IF型无菌超净工作台 苏州净化设备有限公司;HPX-9162数显电热培养箱 上海博迅实业有限公司;DD-5M大型高速离心机 长沙湘仪离心机仪器有限公司;DGG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱上海森信实验仪器有限公司;Mill-Q Academic超纯水系统 美国Millipore公司;N-1001型旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器有限公司;722N 型可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司;高效液相色谱质谱联用(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)仪 美国Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 蓝莓叶多酚提取纯化

蓝莓叶多酚提取:蓝莓叶多酚提取采用醇提法 [10],蓝莓叶于50 ℃烘干,粉碎后过40 目筛,取10 g过筛的粉末加入9.2 倍体积分数为85%的乙醇,66 ℃冷凝回流浸提6 h,提取液离心过滤后于旋转蒸发仪浓缩至10 mL,过0.2 μm无菌滤膜后制得原液,于4 ℃条件下保存备用。

蓝莓叶多酚纯化:将蓝莓叶提取液用HPD200大孔树脂吸附 [11],先用去离子水洗脱多糖、蛋白质等杂物后,再用40%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、冻干。

1.3.2 HPLC-MS/MS条件

取蓝莓叶多酚纯化物,用40%乙醇溶解,经0.22 μm滤膜过滤后,由自动进样器进样10 μL,流速0.6 mL/min,柱温3 5 ℃,采用Z o r b a x S B-C 1 8反相色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),二极管阵列检测器检测波长为280 nm。流动相A:含0.1%醋酸的超纯水;流动相B:含0.1%醋酸的甲醇。

洗脱条件:采用梯度洗脱。0~1 0 m i n:5%~10% B;10~25 min:10%~20% B;25~35 min:20%~23% B;35~45 min:23%~28% B;45~60 min:28%~35% B;60~75 min:35%~50% B;75~80 min:50%~55% B;80~85 min:55%~75% B;85~90 min:75%~5% B;90~100 min:5% B。

MS条件:雾化器N 230(psi);干燥氮气N 210(psi);毛细管温度为350 ℃,毛细管电压为3.5 kV(负离子模式),测定范围m/z 100~2 000。

1.3.3 菌悬液的制备

在无菌超净工作台中,将活化24 h的供试菌种接种在营养肉汤固体培养基上,37 ℃培养24 h,将挑取的单菌落用灭菌后的营养肉汤液体培养基稀释,制得菌悬液浓度为10 6~10 7CFU/mL,备用。

1.3.4 抑菌效果的测定

采用打孔法 [12]测定抑菌效果,在无菌环境中,营养肉汤培养基凝固后,加入100 μL制备好的菌悬液,涂布均匀,再用直径为8 mm打孔器在培养基中央打3 个圆孔,向圆孔中加入100 μL蓝莓叶提取液,每组4 个平行,同时以二甲基亚砜为阴性对照,以那他霉素为阳性对照。37 ℃培养24 h后,测量抑菌圈直径,以抑菌圈平均直径作为衡量提取液对供试致病菌种的抑菌活性的指标。抑菌圈直径按下式计算。

式中:D 1为测量的抑菌圈直径/mm;D为实际抑菌圈直径/mm;8为打孔器直径/mm。

1.3.5 提取液抑菌活性的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)测定

采用肉汤稀释法 [13],在96孔板上将质量浓度为74.40 mg/mL的蓝莓叶提取液母液用营养肉汤液体培养基进行二倍梯度稀释,调整蓝莓叶提取液质量浓度为74.40~0.58 mg/mL,菌液浓度为10 7~10 8CFU/mL,37 ℃培养24 h。从低浓度到高浓度观察微生物生长状况,菌液变澄清的抑菌剂浓度为蓝莓叶提取液对供试致病菌的MIC。

1.3.6 蓝莓叶多酚质量浓度测定

采用福林-酚法 [14]测定:于1 mL蓝莓叶多酚提取液中加入1 mL福林-酚试剂后,加入10% Na 2CO 3,30 ℃水浴反应150 min,750 nm波长处测定吸光度,由于多酚质量浓度在1~7 μg/mL内与吸光度呈线性关系,根据线性回归方程计算出蓝莓叶多酚质量浓度。

1.4 数据处理分析

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析,Origin 8.5软件绘图。

2 结果与分析

2.1 蓝莓叶多酚的组成

图1 蓝莓叶多酚纯化物的HPLLCC图
Fig. 1 HPLC chromatogram of polyphenols extracted from blueberry leaves

由图1可知,蓝莓叶多酚纯化物经HPLC分离,得到8 个峰。为进一步确定蓝莓叶多酚的组成,对这8 个峰进行一级MS和二级MS分析,其结果见表1。

表1 蓝莓叶多酚中主要酚类物质在负离子模式下的一级和二级MS数据
Table 1 Mass spectral data of the major polyphenols extracted from blueberry leaves aves

注:a、b表示离子丰度的大小,其中a>b;-. 未见该物质的其他特征离子。

峰号保留时间/min [M-H] (m/z)MS/MS(m/z)其他特征离子(m/z)对应的化合物123.6353.2190.8178.8(a)/134.8(b)5-O-咖啡酰基奎尼酸229.7337.0190.8162.8(a)/172.8(b)对香豆酰奎尼酸332.1352.9190.8-3-O-咖啡酰基奎尼酸433.1352.9191.3707.2(a)4-O-咖啡酰基奎尼酸534.9577.1289.0425.0(a)/245.0(b)B型原花青素二聚体658.1447.1285.1-山奈酚-3-O-葡萄糖苷771.4477.0300.9-槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸886.5433.0300.8-槲皮素-3-O-戊糖苷

1号峰分子离子峰[M-H] m/z 353.2、二级MS离子碎片峰m/z 190.8;3号峰分子离子峰[M-H] m/z 352.9、二级MS离子碎片峰m/z 190.8;4号峰分子离子峰[M-H] m/z 352.9、二级MS离子碎片峰m/z 191.3,这3 个峰及其他特征峰均与已报道的绿原酸及其衍生物离子碎片相符 [15],由于绿原酸及其衍生物在C 18柱上保留时间从小到大排序是:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸 [16],故推测峰1、峰3、峰4可能分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸。2号峰分子离子峰[M-H] m/z 337.0,二级MS离子碎片峰m/z 190.8,离子峰失去一个香豆酸残基后生成碎片峰奎尼酸(m/z 190.8),可推测峰2为对香豆酰奎尼酸 [17]。5号峰分子离子峰[M-H] m/z 577.1、二级MS离子碎片峰m/z 289.0,其他特征离子如m/z 425.0和m/z 245.0均与已报道的B型原花青素二聚体离子碎片符合 [18],故推测5号峰为B型原花青素二聚体。6号峰分子离子峰[M-H] m/z 447.1、二级MS离子碎片峰m/z 285.1,由相对分子质量448到二级碎片失去一个葡萄糖基而得到山奈酚(m/z 285.1),故推测6号峰为山奈酚-3-O-葡萄糖苷 [19]。7号峰分子离子峰[M-H] m/z 477.0、二级MS离子碎片峰m/z 300.9,从相对分子质量为478到二级碎片由于糖苷键的断裂而生成一个槲皮素离子(m/z 300.9),与已报道的槲皮素3-O-葡萄糖醛酸相符 [20],故推测7号峰为槲皮素3-O-葡萄糖醛酸。8号峰分子离子峰[M-H] m/z 433.0,二级MS离子碎片峰m/z 300.8,从相对分子质量为434到二级碎片失去一个戊糖基得到槲皮素碎片峰(m/z 300.9),与已报道槲皮素3-O-戊糖苷符合 [16],故推测8号峰为槲皮素3-O-戊糖苷。

据Stratil等 [21]报道,植物的品种、栽培环境等多种因素对植物多酚组成及含量影响很大。甚至同一品种在不同采摘季节所含多酚种类和成分含量差异巨大 [22-23]。李颖畅等 [24]从“蓝丰”蓝莓叶中检测出5-O-阿魏酰奎尼酸、表儿茶素没食子酸酯、甲基-芥子酸-己糖苷、绿原酸及槲皮素3-O-葡萄糖苷5种多酚单体。Jan等 [16]发现欧洲野生蓝莓叶中主要为绿原酸和槲皮素-3-O-葡萄糖酸酸。本课题组从南京地区的“兔眼”蓝莓中检测出槲皮素-3-O-戊糖苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、对香豆酰奎尼酸及B型原花青素二聚体8 种多酚物质。说明不同品种的蓝莓叶多酚组成不同,同时表明其生物活性也可能不尽相同,后期研究将在此基础上对该品种蓝莓叶多酚抑菌活性进行探索。

2.2 蓝莓叶多酚的抑菌活性

2.2.1 蓝莓叶多酚对食源性致病菌的抗菌效果

当蓝莓叶多酚纯化前后质量浓度均为74.40 mg/mL时,通过抑菌圈直径大小,可以看出蓝莓叶多酚对6 种致病菌均有抑制效果,但6 种致病菌对蓝莓叶多酚的耐受性有明显的个体差异。由表2可知,在相同质量浓度下,蓝莓叶多酚对所试致病菌抑菌圈直径最高可达(9.31±0.19) mm,最低为(4.50±0.42) mm,其中对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果显著优于质量浓度为50 μg/mL的那他霉素阳性对照(图2),对单增李斯特菌抑制效果与阳性对照无显著性差异(P>0.05),然而对鲍氏志贺氏菌、肠炎沙门氏菌及枯草芽孢杆菌的抑菌效果显著低于阳性对照。因此,蓝莓叶多酚对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制作用最强,对李斯特菌抑制作用次之,对鲍氏志贺氏菌、肠炎沙门氏菌及枯草芽孢杆菌抑制作用较弱。但纯化后的蓝莓叶多酚抑菌作用较纯化前明显,尤其对肠炎沙门氏菌和单增李斯特菌的抑制效果提高40%,差异显著(P<0.05),与香蕉果皮黄酮经纯化后抑菌活性明显提高结果类似 [25]。杨静等 [26]对树莓干果总黄酮纯化前后活性进行比较,发现纯化后的树莓干果总黄酮抑菌活性及抗氧化活性等各项指标较纯化前显著提高,说明大孔树脂纯化后的蓝莓叶多酚杂质更少,对各种活性物质得到了更好的富集,从而使其抑菌活性显著提高。

表2 蓝莓叶多酚的抑菌圈直径
Table 2 Inhibition zone diameter of crude and purified polyphenol extracted from blueberry leaves against foodborne pathogens

注:纯化前后蓝莓叶多酚质量浓度均为74.40 mg/mL;同列肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05);-.抑菌圈不明显。

致病菌抑菌圈直径蓝莓叶多酚纯化前蓝莓叶多酚纯化后阳性对照阴性对照大肠杆菌9.00±0.08 a10.10±0.08 a6.48±0.09 d-金黄色葡萄球菌9.31±0.19 a10.47±0.05 a8.10±0.08 c-枯草芽孢杆菌4.50±0.42 e4.77±0.17 d6.15±0.13 e-单增李斯特菌6.97±0.10 b10.15±0.13 b6.95±0.13 b-肠炎沙门氏菌4.98±0.39 d7.10±0.08 c6.10±0.08 f-鲍氏志贺氏菌6.31±0.38 c7.58±0.05 c10.00±0.08 a

图2 蓝莓叶多酚对大肠杆菌(a)和金黄色葡萄球菌(b)的抑菌效果
Fig. 2 Bacteriostatic effect of crude and purified polyphenols extracted from blueberry leaves

2.2.2 蓝莓叶多酚抑菌的MIC

由表3可知,纯化前的蓝莓叶多酚对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC<2.32 mg/mL,对单增李斯特菌和鲍氏志贺氏菌的MIC<4.65 mg/mL,对枯草芽孢杆菌和肠炎沙门氏菌的MIC<9.30 mg/mL。表明蓝莓叶多酚对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,对肠炎沙门氏菌和枯草芽孢杆菌的抑制活性均低于其他几种供试致病菌。而纯化后的蓝莓叶多酚抑菌活性明增强,对金黄色葡萄球菌的MIC为1.16 mg/mL,对单增李斯特的MIC为2.32 mg/mL,对肠炎沙门氏菌的MIC为4.65 mg/mL。与上述实验具有一致性。

表3 蓝莓叶多酚抑菌效果
Table 3 Bacteriostatic effect of crude and purified polyphenols extracted from blueberry leaves

注:-. 无菌;+.有少量菌;++.有大量菌。

蓝莓叶多酚质量浓度/(mg/mL)鲍氏志贺氏菌74.40------------37.20------------18.60------------9.30------------4.65--++----+---2.32--+++++--++-+1.16++++++++++-++++++0.58++++++++++++++++++++蓝莓叶多酚纯化前蓝莓叶多酚纯化后大肠杆菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌肠炎沙门氏菌单增李斯特菌鲍氏志贺氏菌大肠杆菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌肠炎沙门氏菌单增李斯特菌

2.2.3 纯化后蓝莓叶多酚的质量浓度与抑菌效果

图3 含不同质量浓度的蓝莓叶多酚的抑菌效果
Fig. 3 Bacteriostatic effect of blueberry leaf polyphenols at different concentrations

由图3可知,随着蓝莓叶多酚质量浓度的增加,抑菌效果前期增加较快,当蓝莓叶多酚质量浓度增加到40 mg/mL时,随着蓝莓叶多酚质量浓度的增加,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果稍有增加但变化不大;当蓝莓叶多酚质量浓度增加到60 mg/mL时,随着蓝莓叶多酚质量浓度的增加,对单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌、鲍氏志贺氏菌及枯草芽孢杆菌的抑菌效果逐渐趋于平缓。说明蓝莓叶多酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌的最优质量浓度为40 mg/mL,对单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌、鲍氏志贺氏菌及枯草芽孢杆菌的最优抑菌质量浓度为60 mg/mL,能为蓝莓叶多酚用于食品抑菌剂提供一定的参考价值。而对于同一蓝莓叶多酚质量浓度,蓝莓叶多酚对各供试致病菌的抑菌活性由强到弱为:金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>单增李斯特菌>鲍氏志贺氏菌>肠炎沙门氏菌>枯草芽孢杆菌。

3 结 论

经HPLC-MS/MS研究发现,“兔眼”蓝莓叶主要含有槲皮素-3-O-戊糖苷、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、对香豆酰奎尼酸、B型原花青素二聚体等多种酚类活性物质。

对6 种食源性致病菌抑菌活性显示,蓝莓叶多酚对单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、鲍氏志贺氏菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌和枯草芽孢杆菌都具有较好的抑制效果,对枯草芽孢杆菌和肠炎沙门氏菌的MIC<9.30 mg/mL,其余MIC均<4.65 mg/mL;纯化后的蓝莓叶多酚由于抑菌活性物质的富集,其抑菌活性显著提高,对金黄色葡萄球菌的MIC由纯化前的2.32 mg/mL降低为纯化后的1.16 mg/mL,对单增李斯特的MIC由纯化前的4.65 mg/mL降低为纯化后的2.32 mg/mL,对肠炎沙门氏菌的MIC由纯化前的9.30 mg/mL降低为纯化后的4.65 mg/mL,抑菌活性提高了2 倍。在同一质量浓度下,蓝莓叶多酚对供试致病菌抑菌活性为:金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>单增李斯特菌>鲍氏志贺氏菌>肠炎沙门氏菌>枯草芽孢杆菌。

基于“兔眼”蓝莓叶多酚较好的广谱抑菌活性,若将其作为天然防腐剂运用于食品工业中,则对食品保藏及延长货架期有着重要作用。但是,作为食品防腐剂运用于食品中,仅仅研究蓝莓叶对这6 种食源性致病菌的抑菌活性是不够的,还应采用多种抑菌方法对其抑菌组分间协同效果及抑菌机理进一步研究,同时将蓝莓叶多酚抑菌组分协同作用及对多种细菌、真菌乃至病毒在光照、紫外辐射等因素下的抑菌稳定性进行全面探讨。

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Quantitative Analysis and Antimicrobial Activity of Polyphenols from Blueberry Leaves

ZHANG Tianju 1,2, WANG Fan 2, LI Chunyang 2,*, ZHOU Tao 1,*
(1. Ginling College, Nanjing Normal University, Nanjing 210097, China; 2. Institute of Farm Product Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China)

Abstract:The composition of polyphenols from blueberry leaves was quantitatively analyzed by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) and their antibacterial activities against foodborne pathogens were evaluated. The results showed that the polyphenols from blueberry leaves were mainly composed of 5-O-caffeoylquinic acid, O-p-coumaroylquinic acid, 3-O-caffeoylquinic acid, 4-O-caffeoylquinic acid, B-type proanthocyanidin dimer, kampferol-3-O-hexiside, quercetin-3-O-gluconide and quercetin-3-O-pentoside. The polyphenols extracted from blueberry leaves had inhibitory effects on Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Shigella bogdii, Salmonella and Bacillus subtilis. The minimum inhibitory concentrations (MIC) against Salmonella and Bacillus subtilis were below 9.30 mg/mL, while the MIC value was 4.65 mg/mL against all the other foodborne pathogens. The antibacterial activity against these pathogenic bacteria was in the decreasing order of Staphylococcus aureus > Escherichia coli > Listeria monocytogene > Shigelta bogdii > Salmonella > Bacillus subtilis. This study indicated that diverse bioactive polyphenols from blueberry leaves were identified, some of which had a broad-spectrum antibacterial activity and could be developed as a phytogenic bactericide.

Key words:blueberry leaf polyphenols; composition analysis; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric (HPLC-MS/MS); antibacterial activity

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201623016

中图分类号:TS201.3

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2016)23-0095-05

引文格式:

张添菊, 王帆, 李春阳, 等. 蓝莓叶多酚组成及其抗食源性致病菌活性分析[J]. 食品科学, 2016, 37(23): 95-99.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201623016. http://www.spkx.net.cn

ZHANG Tianju, WANG Fan, LI Chunyang, et al. Quantitative analysis and antimicrobial activity of polyphenols from blueberry leaves[J]. Food Science, 2016, 37(23): 95-99. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201623016. http://www.spkx.net.cn

收稿日期:2016-03-16

基金项目:2014年江苏省自然科学基金面上项目(BK20141386);2015年国家留学基金委(留金发[2015]3012号)留学基金项目(201508320085)

作者简介:张添菊(1992—),女,硕士研究生,研究方向为功能食品与活性物质。E-mail:1151201245@qq.com

*通信作者:李春阳(1966—),男,研究员,博士,研究方向为食品营养化学、农产品精深加工技术等。E-mail:lichunyang968@126.com