豆乳加工中晚期糖基化终产物的调控

王 晨,李 普,卢永翎,郑铁松,吕丽爽*
(南京师范大学金陵女子学院,江苏 南京 210097)

摘 要:目的:通过模拟豆乳的加工条件,考察影响豆乳加工中晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)形成的因素。方法:采用荧光光谱法(λexem=340 nm/465 nm)检测豆乳中荧光性AGEs含量,考察各因素:加工条件(煮沸时间、糖种类、糖添加量和脂肪含量)、贮藏条件(温度和时间)和食源性黄酮(槲皮素、芦丁、染料木素、木犀草素和儿茶素)对荧光性AGEs形成的影响;结果:豆乳体系中,糖种类对荧光性AGEs的影响从低到高依次为:木糖醇<蔗糖<果葡糖浆<葡萄糖<果糖;煮沸时间、糖添加量和脂肪含量均与荧光性AGEs形成呈正相关;在贮藏过程中,荧光性AGEs随着贮藏温度的提高、贮藏时间的延长而增多;黄酮能够有效抑制豆乳加工和贮藏过程中荧光性AGEs的形成,芦丁在2 mmol/L时,抑制效果最好。结论:通过部分条件的改变,如煮沸保持时间、糖种类、糖添加量、脂肪含量、贮藏条件和加入适量的AGEs抑制剂,在一定程度上调控AGEs的形成是可行的。

关键词:豆乳;晚期糖基化终产物;加工贮藏条件;黄酮

晚期蛋白糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)是一类化合物的总称,是通过美拉德反应形成的稳定聚合产物。根据其化学结构的不同可以分为荧光性AGEs和非荧光性AGEs[1]。人体内AGEs有2 种主要来源,包括内源性(细胞内、细胞外空间)和外源性(食品)[2]。研究发现,食品中的AGEs是体内AGEs的主要外部来源,如饮料[3]、饼干[4]、酱油[5]和牛奶[6]等。饮食中摄入的AGEs,约有10%由胃肠道吸收之后被消化[7],大部分会进入肝脏和其他组织,其中约有1/3随尿液排出。近年来,研究表明AGEs与糖尿病及其并发症有着密切的关系。过多地摄入热加工的食品导致糖尿病和肾病,并且诱发炎症、阿尔兹海默症、白内障,促进动脉粥样硬化等疾病的发生[8-10]。目前,用来检测AGEs的方法主要是荧光光谱法,由于荧光分光光度法操作简单、灵敏度高,且适合大批量样品检测,因此本实验采用此法测定样品的荧光值(λexem=340 nm/465 nm)。

豆乳(soymilk)作为亚洲人的传统食品,由大豆制成,含有丰富的脂肪、蛋白质和碳水化合物等成分[11-12]。根据加工方法,豆乳可以分为传统豆乳和现代豆乳两种[13]。传统豆乳在我国也叫豆浆,一般在家庭和作坊生产;现代豆乳是用现代技术和设备生产[14]。豆乳是唯一一种类似于动物性蛋白质的植物蛋白质制品,可以作为牛乳的替代品[15],本实验使用的豆乳是模拟现代豆乳的加工方法制作而成的。豆乳在加工过程中会产生一些风味物质,主要源于豆乳热处理时发生的美拉德反应[16-17],同时也会产生对人体有害的产物AGEs。文献报道豆浆在熟制过程中美拉德反应的变化:随着温度升高,还原糖类物质的积累,羰基首先结合豆糊体系中氨基酸上的氨基,直到大豆11S蛋白变性,蛋白质上暴露出来的赖氨酸残基进一步与羰基发生反应[18]。在这个过程中,豆乳中的蛋白质与还原糖反应会产生AGEs,不仅降低了氨基酸利用率、损害了蛋白质的营养价值,同时对人体造成危害。

国内外有大量文献报道天然食源性黄酮在体内外抑制蛋白糖基化的活性,对其抑制机理也有一定的突破,一些黄酮类化合物可以通过捕获美拉德反应中间产物丙酮醛(methylglyoxal,MGO)和乙二醛(glyoxal,GO)而抑制蛋白糖基化,如:槲皮素(黄酮醇类)[19]、染料木素(异黄酮类)[20]、根皮素(查耳酮类)[21]、花青素[22]和儿茶素(黄烷醇类)[23],不同种类的黄酮均能通过捕获MGO或GO,形成加合物,从而阻止由MGO和GO介导的蛋白糖基化形成AGEs。Zhang Xinchen等[24]将槲皮素、儿茶素、柚皮苷等添加到饼干模型中,结果显示对GO和荧光性AGEs起到有效的抑制作用,同时兼具较好的抗氧化作用。

然而,鲜少有人研究影响豆乳加工和贮藏过程中产生AGEs的因素,以及将食源性黄酮应用其中来抑制AGEs。因此,本研究针对豆乳加工条件以及贮藏条件,监控荧光性AGEs的形成过程;并且通过添加食源性黄酮,筛选出效果最佳的黄酮种类及其添加量。以期有效调控豆乳生产和贮藏过程中有害物质,提高食品安全性,为大豆制品行业的健康发展提供技术和理论指导。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、碳酸氢钠(均为分析纯) 上海国药集团化学试剂有限公司;东北大豆、大豆油(不含抗氧化剂) 邦基(南京)粮油有限公司提供;果糖、葡萄糖、木糖醇、蔗糖 南京甘汁园糖业有限公司;果葡糖浆(F42)、蔗糖酯、单甘酯郑州明瑞化工有限公司;乳酸链球菌素 郑州指南针生物科技有限公司;小苏打 北京康普汇维科技有限公司;纯净水 华润怡宝有限公司。

1.2 仪器与设备

F200酶标仪 瑞士帝肯贸易有限公司;XW-80A微型漩涡混合仪 上海沪西分析仪器厂有限公司;FA2104N电子分析天平 上海精密科学仪器有限公司;PHS-3C数字式pH计 上海三信仪表厂;KQ-300B超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司;MJ-BL 25B1食品料理机 广东美的电器制造有限公司;FJ-200高速旋转均质机 上海标本模型厂;WAY阿贝折光仪 上海光学仪器厂;5415 R型高速冷冻离心机 德国Eppendorf有限公司;ULT 1386-3V超低温冰箱 赛默飞世尔科技(中国)有限公司;HVE-50高压灭菌锅 日本Hirayama制造有限公司;JTM胶体磨 沈阳新光动力机械公司。

1.3 方法

1.3.1 豆乳的基本加工工艺

豆乳的加工制作过程主要参考文献[18,25-27]并加以综合改进。流程如下:

原料→挑选清洗→浸泡→磨浆(豆与水质量比为1∶10)→过滤(100 目)→调配→均质(23 000 r/min,5 min)→煮浆(5 min)→灭菌(121 ℃,20min)→冷却→成品。

1.3.2 豆乳中形成荧光性AGEs的影响因素分析

1.3.2.1 煮沸时间对豆乳中荧光性AGEs的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程,黄豆经过浸泡、磨浆等程序,加入质量分数0.3%的蔗糖酯和单甘酯(质量比为1∶2),充分混匀后,添加质量分数6%的蔗糖,再加入质量分数1.5%的大豆油,用均质机以23 000 r/min,均质5 min。将以上调制好的豆乳加热煮沸,当温度达94~96 ℃时液面翻液,分别维持1、2、3、4、5 min。然后置于高压蒸汽灭菌锅中,121 ℃灭菌20 min,灭菌完成后取出冷却至室温备用。精密量取以上制备的豆乳2 mL,加入4 mL甲醇,涡旋混匀后置于-80 ℃保存1 h,在13 000 r/min离心30 min,精密量取上清液0.3 mL,测定在λexem=340 nm/465 nm波长处的荧光值。以磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer solution,PBS)代替豆乳溶液作空白,每组样品重复3 次。

1.3.2.2 糖种类对豆乳中荧光性AGEs的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程,黄豆经过浸泡、磨浆等程序,加入0.3%的蔗糖酯和单甘酯,充分混匀后,分别添加果糖、蔗糖、木糖醇、果葡糖浆和葡萄糖,使豆浆中每种糖的添加量均为6%,再加入1.5%大豆油,用均质机以23 000 r/min,均质5 min,煮浆2 min,灭菌,取样品按1.3.2.1节的方法测定荧光性AGEs含量。以PBS代替豆乳溶液作空白,每组样品重复3 次。

1.3.2.3 糖添加量对豆乳中荧光性AGEs的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程,黄豆经过浸泡、磨浆等程序,加入0.3%的蔗糖酯和单甘酯,充分混匀后,分别添加3%、6%、9%和12%的蔗糖,加入1.5%大豆油,用均质机以23 000 r/min,均质5 min混匀,煮浆2 min,灭菌,取样品按1.3.2.1节的方法测定荧光性AGEs含量。以PBS代替豆乳溶液作空白,每组样品重复3 次。

1.3.2.4 脂肪含量对豆乳中荧光性AGEs的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程,黄豆经过浸泡、磨浆等程序,加入0.3%的蔗糖酯和单甘酯,充分混匀后,添加6%的蔗糖,取未添加油脂的豆乳15 000 r/min,离心30 min,去掉上层油脂,将下层溶液用高速旋转均质机混匀,作为脱脂豆乳样品;其余分别加入质量分数0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%(豆乳含0.5%的脂肪,因此脂肪含量最终为1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)的大豆油,用均质机以23 000 r/min均质5 min,煮浆2 min,灭菌,取样品按1.3.2.1节的方法测定荧光性AGEs含量。基础加工工艺制作的豆乳中脂肪含量测定参照GB/T 5009.6—2003《食品中脂肪的测定》中罗兹哥特里法。以PBS代替豆乳溶液作空白,每组样品重复3 次。

1.3.2.5 贮藏温度和时间对豆乳中荧光性AGEs的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程,黄豆经过浸泡、磨浆等程序,加入0.3%的蔗糖酯和单甘酯、0.02%乳酸链球菌素;充分混匀后,添加6%的蔗糖和1.5%的大豆油,用均质机以23 000 r/min,均质5 min。将以上调制好的豆乳加热煮沸保持2 min。然后置于高压蒸汽灭菌锅中,121 ℃灭菌20 min,灭菌完成后取出冷却至室温。将以上制备好的豆乳分别贮藏在4、25 ℃和37 ℃的培养箱中,于0、5、10、15、30、60 d取样,置于-80 ℃备用,取样品按1.3.2.1节的方法测定荧光性AGEs含量。以PBS代替豆乳溶液作空白,每组样品重复3 次。

1.3.3 黄酮对豆乳中荧光性AGEs形成的影响

1.3.3.1 黄酮在豆乳加工过程中对荧光性AGEs形成的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程,黄豆经过浸泡、磨浆等程序,加入0.3%的蔗糖酯和单甘酯、0.02%乳酸链球菌素;以23 000 r/min,均质5 min充分混匀后,添加6%的蔗糖和1.5%的大豆油,分别往基础豆乳样品中加入一定量的槲皮素(或木犀草素、芦丁、染料木素和儿茶素),使其最终浓度分别为0.2、1.0、2.0 mmol/L,再用均质机以23 000 r/min,均质5 min。将以上调制好的豆乳加热煮沸保持2 min,倒入饮料瓶中,旋紧盖子。然后置于高压蒸汽灭菌锅中,121 ℃的高温条件下杀菌20 min,灭菌完成后取出冷却至室温。取样品按1.3.2.1节的方法测定荧光性AGEs含量。以PBS代替豆乳作空白,每组样品做3 个平行。

1.3.3.2 黄酮在豆乳贮藏体系中对荧光性AGEs形成的影响

按照1.3.1节的豆乳加工流程制备豆乳,分别于基础豆乳样品中加入一定量的槲皮素、芦丁、染料木素,使其最终浓度为2.0 mmol/L,将以上调制好的豆乳加热煮沸2 min,倒入饮料瓶中,旋紧盖子。然后置于高压蒸汽灭菌锅中,121 ℃杀菌20 min,灭菌完成后取出冷却至室温。将制备好的豆乳分别贮藏在25 ℃和37 ℃的培养箱中,分别于0、5、10、15、30、60 d取样,-80 ℃保存,取样品按1.3.2.1节的方法测定AGEs含量。以PBS代替豆乳溶液作空白,每组样品做3 个平行。

1.4 数据统计分析

应用SPSS 17.0软件分析数据,使用单因素方差分析(ANOVA)中Duncan进行检验(P<0.01表示差异极显著,P<0.05表示差异显著),不同处理的显著性差异以不同字母表示。

2 结果与分析

2.1 影响豆乳中MGO/GO和荧光性AGEs含量的因素

2.1.1 煮沸时间对豆乳中荧光性AGEs形成的影响

图1 煮沸时间对豆乳中荧光性AGEs形成的影响
Fig. 1 Effect of boiling time on fluorescent AGEs formation in soymilk

由图1可知,随着煮沸保持时间的延长,荧光值不断增大,荧光性AGEs含量呈上升趋势。在5 min时荧光值达到最大,表明豆乳在煮沸过程中生成了大量荧光性AGEs。文献[1]报道AGEs的形成主要是通过氨基化合物和羰基化合物生成薛夫碱,经过重排形成Amadori产物,然后进一步生成1,2-二羰基化合物(MGO和GO)等,再经过一系列重排、氧化、还原等生成荧光性AGEs。可以推测,煮沸时间延长,促进了美拉德反应的进程,豆乳中的糖类物质与蛋白质或氨基酸反应,产生荧光性AGEs。另外,煮沸时间对蛋白糖基化后续反应有一定的影响,与文献[28-29]报道一致。

2.1.2 糖种类对豆乳中荧光性AGEs含量的影响

图2 糖种类对豆乳中荧光性AGEs形成的影响
Fig. 2 Effect of sugar type on fluorescent AGEs formation in soymilk

从图2可以看出,不同的糖种类对豆乳中荧光性AGEs的产生影响较大(P<0.01)。促进形成作用由强至弱依次为果糖>葡萄糖>果葡糖浆>蔗糖>木糖醇,其中最大值是最小值的1.3 倍。值得注意的是,添加木糖醇体系也有一定量荧光性AGEs的产生。据文献报道,单糖、低聚糖、多糖加热后自身发生焦糖化反应,产生MGO;糖发生羟醛缩合和自氧化生成GO[30-31]。而高活性的MGO和GO又进一步参与蛋白质和氨基酸反应,从而产生AGEs。因此,葡萄糖、果糖和果葡糖浆(单糖)较蔗糖(二糖)更易发生糖基化反应形成荧光性AGEs,而针对于糖尿病用的木糖醇,荧光性AGEs产生的量最低,相对安全性最高。

2.1.3 糖添加量对豆乳中荧光性AGEs形成的影响

图3 蔗糖添加量对豆乳中荧光性AGEs形成的影响
Fig. 3 Effect of sugar concentration on fluorescent AGEs formation in soymilk

如图3所示,豆乳中荧光性AGEs形成量随糖添加量的增多也逐步增高。蔗糖添加量增加(0%~6%)时,荧光性AGEs形成量迅速增加,随后糖添加量继续增加(6%~12%),荧光性AGEs形成量较平稳略有增加。这可能是在豆乳体系中,低添加量时随着糖含量的增加(小于6%),加速蛋白糖基化反应的进行;但是当糖添加量增加到一定程度时(大于6%),蛋白质参与糖基化反应,形成荧光性AGEs达到最高值至基本饱和[32]。所以,不加糖时,糖基化产物最低,产品安全性最高。

2.1.4 脂肪含量对豆乳中荧光性AGEs形成的影响

由图4可知,荧光性AGEs的形成量随着油脂含量增加逐步升高,与油脂含量呈正相关。当豆乳中脂肪含量0.0%~1.0%时,荧光性AGEs形成量增加显著,随后脂肪含量继续增加(1.5%~3.0%),荧光性AGEs形成量维持在一定范围。据文献报道,食品在加热过程中,油脂的氧化会产生GO[33],而GO进一步参与豆乳中氨基酸和蛋白质反应,促使产生更多的AGEs。因此,脱脂豆乳中荧光性AGEs形成量最低,有利于豆乳的安全。

图4 脂肪含量对豆乳中荧光性AGEs形成的影响
Fig. 4 Effect of soybean oil concentration on fluorescent AGEs formation in soymilk

2.1.5 贮藏温度和时间对豆乳中荧光性AGEs形成的影响

图5 贮藏温度和时间对豆乳中荧光性AGEs形成的影响
Fig. 5 Effect of storage time and temperature on fluorescent AGEs formation in soymilk

由图5可知,贮藏60 d内的豆乳,荧光性AGEs形成量随着贮藏温度的提高(4~37 ℃),贮藏时间的延长而增大。30 d内,差异显著(P<0.05)。同一贮藏时间不同温度条件下,豆乳中荧光性AGEs形成量存在显著差异(P<0.05)。在4~37 ℃,15 d内增长幅度较大,均接近峰值,15~60 d变化不大;30 d时,37 ℃条件下豆乳中荧光性AGEs形成量是4 ℃是的1.30 倍。这可能是由于在豆乳中,贮藏温度越高、时间越长,会促进糖类物质发生羟醛缩合和脂肪发生氧化[30-31,33-34],产生的1,2-二羰基化合物越多,进而产生的AGEs也越多。由此,冰箱低温存放豆乳更有利于降低蛋白糖基化的进程,减少AGEs的产生,提高产品的安全性。

2.2 黄酮种类和浓度对豆乳中荧光性AGEs形成的影响

2.2.1 对豆乳加工过程中荧光性AGEs形成的影响

在豆乳加工过程中,随着黄酮浓度的提高,儿茶素、槲皮素、芦丁、染料木素和木犀草素5 种黄酮对荧光性AGEs的抑制均呈剂量-效应关系,结果如图6所示。对荧光性AGEs,除儿茶素外,其他黄酮(在2.0 mmol/L时)的抑制率达到70%以上。因此,1.0~2.0 mmol/L黄酮在豆乳体系中,依然对荧光性AGEs的抑制呈现较快的增长速率,在黄酮可以完全溶解的情况下,以2.0 mmol/L为最佳浓度。5 种黄酮类化合物对荧光性AGEs的抑制效果排序为:芦丁>槲皮素>木犀草素>染料木素>儿茶素。以槲皮素为例,当浓度由0.2 mmol/L增加到1.0 mmol/L时,抑制率增加了30.2%,浓度为1.0 mmol/L时即可达到74.5%的抑制效果,而芦丁的抑制效果与槲皮素差异性不显著。另外,推测黄酮对AGEs的抑制途径:一方面捕获中间产物1,2-二羰基化合物,抑制由1,2-二羰基化合物介导形成的AGEs,另一方面黄酮可以通过抗氧化抑制自由基引发的AGEs[19-23]

图6 不同黄酮对豆乳加工过程中荧光性AGEs形成的影响
Fig. 6 Effects of different flavonoids on the formation of fluorescent AGEs in soy milk during processing

2.2.2 黄酮种类和浓度对豆乳贮藏过程中荧光性AGEs形成的影响

图7 黄酮在豆乳贮藏过程中抑制荧光性AGEs形成的能力
Fig. 7 Inhibitory efficient of flavonoids on fluorescent AGEs formation in soymilk during storage

为了考察在豆乳贮藏过程中,黄酮对AGEs抑制的后续效能,选择了效果较好的槲皮素、芦丁和大豆本身含有的染料木素,浓度为2.0 mmol/L。分别考察添加黄酮的豆乳在25 ℃和37 ℃,60 d之内贮藏条件下荧光性AGEs形成量的变化情况。如图7所示,25 ℃与37 ℃,同种黄酮抑制效果差异性不显著,但随着贮藏时间的延长,3 种黄酮抑制效果均呈现缓慢上升趋势。在60 d内,同一时间点3 种黄酮对荧光性AGEs的抑制率均有小幅度无规律性的波动,总体差异不显著。表明黄酮在贮藏过程中可以有效抑制AGEs的形成;其中抑制效率排第3位的染料木素抑制率增加最为显著(66%~85%),可见染料木素更为适宜作为长效抑制剂;而槲皮素和芦丁两者的抑制效率始终差异性不显著,随着时间的变化,抑制率增加幅度不大。由此可见,在豆乳中添加黄酮不仅可以抑制加工过程的荧光性AGEs的形成,亦在贮藏过程中对蛋白糖基化起到很好的抑制作用。

3 结 论

豆乳体系中,糖种类对AGEs形成的影响中,从高到低依次为:果糖>葡萄糖>果葡糖浆>蔗糖>木糖醇;煮沸保持时间、糖添加量和脂肪含量与荧光性AGEs形成量均呈正相关。因此,在豆乳加工过程中,不添加糖,或添加木糖醇,脱脂可以大大减少荧光性AGEs的形成。在不同的贮藏温度和时间条件下荧光性AGEs含量随着贮藏温度的提高(4、25、37 ℃)、贮藏时间的延长而增大。在0~30 d,豆乳中荧光性AGEs形成量增加明显,30~60 d,呈持平状态。故产品30 d内贮藏尽量保持低温条件下。

在豆乳体系中,对蛋白糖基化的抑制效果越好,荧光性AGEs越少。5 种黄酮对蛋白糖基化的抑制效果由强到弱依次为:芦丁>槲皮素>木犀草素>染料木素>儿茶素,黄酮的最佳浓度为2.0 mmol/L。在贮藏过程中,槲皮素、芦丁和染料木素均对豆乳中荧光性AGEs的抑制效果,随着贮藏时间的延长(0~60 d),整体呈增长趋势,染料木素抑制率增长最快,更为适宜作为长效抑制剂。

以研究影响豆乳中荧光性AGEs的因素为导向,黄酮抑制豆乳中蛋白糖基化终产物为核心,阐明了影响植物蛋白饮料产生荧光性AGEs的各个影响因素、5 种食源性黄酮对豆乳蛋白糖基化的抑制效果,以此达到有效调控豆乳生产和贮藏过程中有害物质的产生,为大豆制品行业的健康发展提供了新思路。

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Regulation of Advanced Glycation End Products in Soymilk

WANG Chen, LI Pu, LU Yongling, ZHENG Tiesong, LLishuang*
(Ginling College, Nanjing Normal University, Nanjing 210097, China)

Abstract:Purpose: To investigate the factors influencing the formation of fluorescent advanced glycation end products (AGEs) in soymilk model system. Methods: The concentration of fluorescent AGEs was detected by fluorescence spectrometry (λexem= 340 nm/465 nm). The factors investigated included processing conditions (boiling time, sugar type, sugar concentration and soybean oil concentration), storage conditions (temperature and time) and flavonoids (quercetin, rutin, genistein, luteolin and catechins). Results: The effect of different sugars on fluorescent AGEs formation was in the increasing order: xylitol < sucrose < fructose syrup < glucose < fructose. Boiling time, sugar concentration and soybean oil concentration showed a positive correlation with fluorescent AGEs. During storage, the formation of fluorescent AGEs increased with increasing temperature and time. Flavonoids could effectively inhibit the formation of fluorescent AGEs during the processing and storage of soybean milk, especially at a concentration of 2 mmol/L. Conclusion: By changing some conditions, such as boiling time, sugar type, sugar concentration, fat concentration, storage condition and using an appropriate amount of AGEs inhibitors, the regulation of the formation of AGEs is feasible.

Key words:soymilk; advanced glycation end products (AGEs); processing and storage conditions; flavonoids

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201713008

中图分类号:TS201.2

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2017)13-0047-06

引文格式:

王晨, 李普, 卢永翎, 等. 豆乳加工中晚期糖基化终产物的调控[J]. 食品科学, 2017, 38(13): 47-52. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201713008. http://www.spkx.net.cn

WANG Chen, LI Pu, LU Yongling, et al. Regulation of advanced glycation end products in soymilk[J]. Food Science, 2017, 38(13): 47-52. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201713008. http://www.spkx.net.cn

收稿日期:2016-05-30

基金项目:国家自然科学基金面上项目(31571783)

作者简介:王晨(1991—),女,硕士研究生,研究方向为食品科学。E-mail:839541621@qq.com

*通信作者:吕丽爽(1969—),女,教授,博士,研究方向为食品化学和功能性食品。E-mail:lishuanglv@126.com