巴莲莲子生物碱提取物对CCl4诱导小鼠肝损伤的预防效果

冯 霞1,孙 鹏1,易若琨1,彭德光2,赵 欣1,*

(1.重庆第二师范学院生物与化学工程学院,重庆市功能性食品协同创新中心,重庆市功能性食品工程技术研究中心,

功能性食品研发重庆市工程实验室,重庆 400067;2.重庆市巴莲品种选育及深加工企业工程技术研究中心,重庆 400041)

摘 要:为检测巴莲莲子生物碱提取物(alkaloids extracted from Ba lotus seed,AEBLS)对CCl4诱导的小鼠肝损伤的预防作用,以732交换树脂分离纯化的AEBLS为研究对象,对小鼠灌胃低、高剂量(50 、100 mg/(kg·d))AEBLS后注射2 mL/kg CCl4诱导小鼠发生肝损伤,观察小鼠肝指数、血清指标和肝组织中相关mRNA表达的强度。结果显示,AEBLS可以降低肝损伤小鼠的肝质量和肝指数(P<0.05);AEBLS可以下调肝损伤小鼠血清中的天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、甘油三酯、总胆固醇、尿素氮、一氧化氮、丙二醛水平和上调白蛋白、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平(P<0.05);同时AEBLS还可以下调肝损伤小鼠血清中白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-12、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和γ-干扰素细胞因子水平(P<0.05)。实时聚合酶链式反应也证实AEBLS能上调肝损伤小鼠肝组织中Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT、GSH-Px、核因子κB抑制蛋白α的mRNA表达和下调核因子κB-p65、诱导型一氧化氮合成酶、环氧化酶-2、TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达(P<0.05)。由此可见,AEBLS对CCl4引发的肝损伤有较好的预防作用,且效果接近药物水飞蓟素,具有较好的功能性作用。

关键词:巴莲莲子;生物碱;mRNA表达;肝指数;谷胱甘肽过氧化物酶

冯霞, 孙鹏, 易若琨, 等. 巴莲莲子生物碱提取物对CCl4诱导小鼠肝损伤的预防效果[J]. 食品科学, 2017, 38(17): 216-222. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717035. http://www.spkx.net.cn

FENG Xia, SUN Peng, YI Ruokun, et al. Preventive effects of alkaloids extracted from Ba lotus seeds on CCl4-induced hepatic injury in mice[J]. Food Science, 2017, 38(17): 216-222. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717035. http://www.spkx.net.cn

巴莲莲子是一种主要产于重庆地区的睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)干燥后的成熟种子,莲子具有多种功效,包括补脾止泻、止带、益肾涩精、养心安神等,可用于保健食品的开发与生产[1]。研究表明莲子含有多种生物活性成分,其中生物碱的含量能达到2%[2]。最近的研究进一步表明巴莲莲子通过其含有的生物活性物质也产生抗氧化、抗炎和抗炎作用[3-5],巴莲及其莲子已经被逐步开发利用,通过对其功能性作用研究后开发出的保健饮料等多种加工品已经进入市场[6],巴莲及其莲子具有很好的开发利用价值。

从天然植物中可提取到较多类型的生物碱物质,其中大多数生物碱均具有生物活性作用,通过现代分子生物学方法证实植物中提取生物碱具有一定的降血压、抗血压和抗癌效果[7]。通过莲子成分的分析结果显示莲子含有的生物碱包括莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱等20多种异喹啉,同样具有较好的功能性作用和保健品开发价值[8]

肝脏是重要的代谢生理器官,肝损伤对人体能造成严重的危害,导致肝损伤的原因较多,其中化学性肝损伤是造成肝功能紊乱的常见原因,包括大量酒精摄入,药物的副作用和环境中的化学毒性物质均可能造成肝损伤,严重的化学性肝损伤甚至可引起肝硬化和肝癌[9]。CCl4是实验室条件诱导动物肝损伤的常见化学诱导剂,CCl4在引发肝损伤的过程中能导致肝细胞大量分泌炎症因子,从而加剧炎症,加重肝损伤;同时,CCl4能促使肝细胞微粒体产生Cl和CCl3从而引起肝微粒体脂质过氧化,导致细胞膜脂质过氧化并破坏细胞膜,导致肝损伤[10]。本研究也利用CCl4对肝脏的作用,建立小鼠化学性肝损伤模型,以巴莲莲子生物碱提取物(alkaloids extracts of Ba lotus seed,AEBLS)为研究对象,观察AEBLS对CCl4小鼠诱导肝损伤的预防作用,并进一步采用分子生物学方法检测小学血清和肝组织相关指标,从机制上阐明AEBLS对小鼠肝损伤的预防作用机理。研究结果将有利于巴莲资源的开发利用,为巴莲应用于食品加工和保健品研发积累理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与实验动物

巴莲莲子购自于重庆当地市场。

DMEM液体培养基 美国Hyclone公司;天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)测定试剂盒、丙氨酸氨基转移酶(aminotransferase,ALT)测定试剂盒、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)测定试剂盒、甘油三酯(triglyceride,TG)测定试剂盒、总胆固醇(total cholesterol,TC)测定试剂盒、尿素氮(urea nitrogen,BUN)测定试剂盒、白蛋白(albumin,ALB)测定试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)测定试剂盒、一氧化氮(nitric oxide,NO)测定试剂盒、过氧化氢酶(catalase,CAT)测定试剂盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)测定试剂盒 南京建成生物工程研究所;白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-12、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)酶联免疫试剂盒 美国Biolegend公司;CycleTESTTM PLUS DNA染色试剂盒 德国Becton Dickinson公司;Trizol试剂、Oligo(dT)18、RNase、dNTP和鼠白血病病毒(murine leukemia virus,MLV) 美国Invitrogen公司;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)引物 天根生化科技有限公司;其余试剂均为国产分析纯。

清洁级昆明小鼠(6 周龄,雄性)购于重庆医科大学实验动物中心(动物许可证SCXK(渝)2012-0001),控温(22±4)℃并在相对湿度(50±20)%条件下饲养1 周后进行实验。

1.2 仪器与设备

Biomate3S紫外-可见光分光光度仪、3111二氧化碳培养箱、StepOne Plus定量PCR仪、LUX多功能性酶标仪美国Thermo Fisher Scientifi c公司;ICEN-24R高速冷冻离心机 杭州奥盛仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 AEBLS提取

将冷冻干燥后的巴莲莲子磨成细粉,取100 g巴莲莲子粉末加入1 000 mL的80%乙醇溶液后在50 ℃条件下提取1 h,然后收集过滤后的滤渣再重复以上的提取方法再提取一次,收集2 次的过滤液后在50 ℃条件下将滤液过732交换树脂收集3 h。然后用蒸馏水洗掉水溶性杂质后以3 mL/min的速率用80%乙醇溶液洗脱生物碱[11]。重复以上提取10 次收集乙醇洗脱液后用旋转蒸发法蒸干乙醇得到AEBLS用以动物实验。

1.3.2 实验分组及设计

将实验用昆明小鼠分为5 组,每组10 只小鼠,分别为正常组、模型组、水飞蓟素灌胃组(阳性对照组)、AEBLS灌胃组低剂量组(50 mg/(kg·d),以体质量计,下同)、AEBLS灌胃组高剂量组(100 mg/(kg·d))。将适应饲养1 周后的小鼠开始进行实验,正常组和模型组小鼠每天灌胃2 mL生理盐水;水飞蓟素灌胃组每天按100 mg/kg灌胃水飞蓟素溶液0.2 mL;AEBLS灌胃高、低剂量组小鼠每天按50 mg/kg和100 mg/kg分别灌胃AEBLS,以上灌胃持续2 周。第14日对除正常组外所有小鼠腹腔注射CCl4诱导剂(2 mL/kg;CCl4与橄榄油体积比1∶1),然后对所有小鼠实施禁食,但允许自由饮水。禁食24 h后断颈处死小鼠,心脏取血浆并解剖取肝脏待用[9]

1.3.3 小鼠血清水平测定

4 000 r/min离心10 min分离血浆,分离上层血采用AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN、ALB、SOD、NO、CAT、MDA和GSH-Px试剂盒测定小鼠血清水平[9]

1.3.4 小鼠血清细胞因子水平测定

将离心分离到的血清采用IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子测定试剂盒测定小鼠血清细胞因子水平[9]

1.3.5 RT-PCR实验测定小鼠肝组织mRNA表达

取小鼠的肝组织粉碎后用RNAzol提取肝组织的总RNA,然后将总RNA稀释到1 μg/μL。取2 μL稀释后的总RNA提取液,在其中依次加入1 μL的Oligo(dT)18、RNase、dNTP、MLV酶和10 μL 5×buffer,在条件37 ℃ 120 min,99 ℃ 4 min,4 ℃ 3 min下合成cDNA。然后以cDNA为模板,进行Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT、GSH-Px、NF-κB-p65、IκB-α、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达的扩增(表1),同时以持家基因GAPDH作为内参照按同样条件进行扩增。最后用含1%溴化乙锭琼脂电泳检查PCR扩增产物[12]。半定量分析按以下公式计算。

表达相对对照组倍数=(对应组相关表达强度/对应组GAPDH表达强度)/(对照组相关表达强度/对照组GAPDH表达强度)

表 1 实验所用逆转录聚合酶链式反应引物序列
Table 1 Sequences of reverse transcription PCR primers used in this study

1.4 数据分析

所有实验重复3 次,结果取平均值,然后使用SAS 9.1统计软件采用One-way ANOVA方法分析各组数据在P<0.05水平上相互是否具有显著差异。

2 结果与分析

2.1 AEBLS对小鼠肝指数的影响

表 2 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠的体质量、肝质量和肝指数的影响(n=10)
Table 2 Effects of AEBLS on body weight, liver weight and liver index in mice with CCl4-induced hepatic damage (n= 10)

注:同列肩标小写字母不同表示组间差异显著(P<0.05)。下同。

如表2所示,各组小鼠的体质量无显著差异,模型组小鼠的肝质量显著高于其他各组(P<0.05),正常组的肝质量最低,通过AEBLS灌胃处理,CCl4诱导肝损伤小鼠的肝质量下降,且高剂量AEBLS灌胃小鼠的肝质量下降得更多。肝指数的结果与肝质量结果相似,模型组的肝指数最高,随着AEBLS灌胃剂量的增高肝指数下降(P<0.05),100 mg/kg AEBLS灌胃组小鼠肝指数略高于同剂量药物水飞蓟素灌胃小鼠的肝指数。

2.2 AEBLS对小鼠血清AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN和ALB水平的影响

表 3 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠血清AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN和ALB水平的影响(n= 10)
Table 3 Effects of AEBLS on serum levels of AST, ALT, ALP, TG, TC, BUN and ALB in mice with CCl4-induced hepatic damage (n=10)

由表3可以看出,正常组小鼠血清的AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN水平最低,ALB水平最高;CCl4诱导肝损伤的模型组呈现出相反的趋势,AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN水平最高,ALB水平最低。水飞蓟素和AEBLS灌胃可以显著下调肝损伤小鼠的AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN水平和上调ALB水平(P<0.05),其中水飞蓟素使这些指标最接近于正常组,而高剂量AEBLS可以使这些指标接近于同剂量的水飞蓟素。

2.3 AEBLS对小鼠血清SOD、NO、CAT、MDA和GSH-Px水平的影响

表 4 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠血清SOD、NO、CAT、MDA和GSH-Px水平的影响(n=10)
Table 4 Effects of AEBLS on serum levels of SOD, NO, CAT, MDA and GSH-Px in mice with CCl4-induced hepatic damage (n= 10)

如表4所示,CCl4将导致小鼠血清中的SOD、CAT、GSH-Px水平下降和NO、MDA水平上升(P<0.05),水飞蓟素和AEBLS均可抑制这些变化,且100 mg/kg的水飞蓟素能够最大程度地抑制这些变化,同剂量AEBLS的效果接近于阳性对照水飞蓟素。

2.4 AEBLS对小鼠血清IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子水平的影响

如表5所示,模型组小鼠血清中的IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子水平显著高于其他各组小鼠(P<0.05)。相对于模型组小鼠,水飞蓟素和AEBLS可以显著下调小鼠血清中的IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子水平(P<0.05),水飞蓟素的作用最为明显,能使小鼠血清中的细胞因子水平更为接近正常组小鼠,而AEBLS也能起到下调IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子水平作用,且高剂量的AEBLS(100 mg/kg)的作用更强。

表 5 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠血清IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子水平的影响(n=10)
Table 5 Effects of AEBLS on serum levels of IL-6, IL-12, TNF-α and IFN-γ in mice with CCl4-induced hepatic damage (n= 10)

2.5 AEBLS对小鼠肝组织中Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT和GSH-Px mRNA表达的影响

Fig. 1 Effects of AEBLS on mRNA expression levels of Mn-SOD, Cu/Zn-SOD, CAT and GSH-Px in liver of the mice with CCl4-induced hepatic damage (n = 6)

表 6 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠肝组织中Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT和GSH-Px mRNA表达影响的半定量分析(n=6)
Table 6 Semi-quantitative analysis of the effects of AEBLS on mRNA expression levels of Mn-SOD, Cu/Zn-SOD, CAT andGSH-Px in liver of the mice with CCl4-induced hepatic damage (n=6)

由图1和表6可以看出,正常组小鼠肝脏中的Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT和GSH-Px mRNA表达最强,而模型组表达最弱。水飞蓟素灌胃可以显著上调肝损伤小鼠肝脏的Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT和GSH-Px的mRNA表达(P<0.05),AEBLS同样可以上调这些表达,且高剂量的AEBLS效果更为明显,通过半定量计算结果进一步看出,100 mg/kg剂量水飞蓟素和AEBLS的效果均较为明显,且两者没有显著差异(P>0.05)。

2.6 AEBLS对小鼠肝组织中NF-κB-p65、IκB-α、iNOS和COX-2 mRNA表达的影响

图 2 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠肝组织中NF-κB-p65、IκB-α、iNOS和COX-2 mRNA表达强度的影响(n=6)
Fig. 2 Effects of AEBLS on mRNA expression levels of NF-κB-p65, IκB-α, iNOS and COX-2 in liver of mice with CCl4-induced hepatic damage (n = 6)

表 7 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠肝组织中NF-κB-p65、IκB-α、iNOS和COX-2 mRNA表达影响的半定量分析(n=6)
Table 7 Semi-quantitative analysis of the effects of AEBLS on mRNA expression levels of NF-κB-p65, IκB-α, iNOS andCOX-2 in liver of mice with CCl4-induced hepatic damage (n= 6)

由图2和表7可知,CCl4诱导肝损伤后,模型组小鼠肝脏的NF-κB-p65、iNOS和COX-2表达显著强于其他各组,而IκB-α表达则显著弱于其他各组(P<0.05);正常组小鼠肝脏的NF-κB-p65、IκB-α、iNOS和COX-2表达强度与模型组小鼠相反。相对于阳性对照组水飞蓟素和AEBLS可以下调小鼠肝脏的NF-κB-p65、iNOS、COX-2表达和上调IκB-α表达,且高剂量的AEBLS上调的NF-κB-p65、iNOS、COX-2表达和上调的IκB-α表达接近阳性对照组(水飞蓟素灌胃组)和正常组。

2.7 AEBLS对小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响

由图3和表8可以看出,正常组小鼠肝脏组织中的TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达最弱,CCl4可导致肝组织中的TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达,AEBLS可抑制TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达,且相同剂量下AEBLS的作用仅略微弱于阳性药物水飞蓟素。

图 3 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达强度的影响(n=6)
Fig. 3 Effects of AEBLS on mRNA expression levels of TNF-α, IL-1β and IL-6 in liver of mice with CCl4-induced hepatic damage (n = 6)

表 8 AEBLS对CCl4诱导肝损伤小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达影响的半定量分析(n=6)
Table 8 Semi-quantitative analysis of for the effects of AEBLS on mRNA expression levels of TNF-α,IL-1β andIL-6 in liver of mice with CCl4-induced hepatic damage (n= 6)

3 讨 论

肝脏是腹腔内最大的实质性器官,肝脏出现损伤后,不仅威胁机体健康,严重的情况下还将危及生命。肝质量和肝指数作为评价CCl4诱导肝损伤的程度已经被应用于研究,高肝质量和肝指数是肝损伤的表现之一[13],本研究也得到了相似的结果,结果显示,相对于肝损伤小鼠AEBLS可以下调肝损伤小鼠的肝质量和肝指数,且效果接近于肝损伤治疗药物水飞蓟素。

AST主要存在于肝细胞浆和肝细胞的线粒体中,而ALT主要存在于肝细胞浆,肝细胞坏死会导致ALT和AST在机体内增加[14]。CCl4引发肝组织发生脂质过氧化反应,从而肝细胞膜通透性发生改变,肝细胞内的ALP水平急剧上升[15]。肝损伤可导致脂肪酸向肝内转移,造成肝内TG含量的升高,同时TG和TC也反映肝脏脂质过氧化的情况,机体发生脂质过氧化TG和TC 水平上升[16]。肝损伤影响肝功能将进一步导致肾功能受损,使蛋白质代谢的产物BUN在血液中的含量提升,同时肝损伤也将影响ALB在机体内的合成、运输和释放,使血液中ALB含量下降[17]

CCl4将导致机体发生氧化,机体自身对氧化损伤能以非酶性和酶性两种抗氧化2 种方式进行防御,其中调控提升SOD、CAT和GSH-Px是机体进行酶性抗氧化的主要机制[16]。SOD具有催化超氧化物自由基的作用,能够清除自由基,同时CAT和SOD也有协同作用,加强清楚自由基的作用[18]。CAT是机体中的一种重要抗氧化酶,CAT能够清除机体中的H2O2,从而起到抑制氧化应激的作用,减轻CCl4造成的机体氧化,抑制肝损伤[19]。GSH-Px是一种重要的催化H2O2分解的酶,催化还原型谷胱甘肽对H2O2的还原反应能够保护细胞膜,避免细胞损伤[20]。MDA是脂质过氧化的代谢产物,肝损伤后MDA在体内大量堆积[16]。NO和其氧化产物含量的增加能够导致细胞表面磷脂及蛋白发生损伤,从而促进组织的炎性渗出及损伤[21]。同时,NO能与超氧阴离子反应形成过氧亚硝阴离子ONOO,加剧氧化应激反应,进一步导致细胞毒性加剧肝损伤[22]

CCl4能够导致机体发生氧化,促使肝脏发生炎症反应,从而体现在小鼠血清中IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平大幅度上升[9]。IL-6是由Th2细胞分泌的因子,参与体液免疫应答,Th2在机体中水平升高时可发生内脏功能性损害[23]。IL-6能够促进T淋巴细胞的分化、增殖和促进抗体的产生,还能够改变细胞内G细胞活性和上调中性粒细胞功能,对机体的炎症反应有增强作用[24]。IL-12是NK细胞的激活因子,而且作用最为强烈,肝损伤时肝细胞过度凋亡和过强的免疫应答将加剧损伤,这与IL-12增加CD8T细胞的杀伤功能有关[25]。TNF-α与肝细胞膜上TNF-αR1结合,能导致细胞内双链基因组DNA变成寡脱氧核苷酸片段,促使干细胞凋亡;另外,TNF-α还可以通过激活NF-κB使机体内的炎症表达加剧,使肝组织损伤加剧[26]。IFN-γ是前炎症细胞因子,能够加强肝细胞对TNF-α的敏感性,使肝细胞更容易受损[27]。肝脏组织受损后出现的氧化应激状态能引起包括TNF-α、IL-1β和IL-6在内的炎症因子在体内的平衡失调,导致TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子在肝脏内的含量提升[18]

Mn-SOD和Cu/Zn-SOD是机体内SOD的异构体,Mn-SOD是存在于线粒体中的以Mn4+为活性中心的一种SOD自由基清除剂;Cu/Zn-SOD是存在于胞浆中以Cu2+和Zn2+为活性中心的另一种SOD自由基清除剂[28]。肝脏和心脏是含线粒体最丰富的器官,在CCl4诱导肝损伤后Mn-SOD的活性出现明显下降,本研究也得到了相同的结果[29]。Cu/Zn-SOD可以清除机体内的O2•造成的毒性作用,可以保护内脏组织[30]。研究表明CCl4导致机体内发生氧化应激反应,产生大量自由基,Mn-SOD和Cu/Zn-SOD可抑制体内的自由基,起到预防肝损伤的作用[31]

NF-κB是调节炎症反应的关键因子,对包括IL-6和TNF-α等早期炎症应答基因均有影响,炎症反应下体现出强表达;一般情况下NF-κB和IκB-α处于结合状态体现出无活性,在外因诱发炎症状态下NF-κB和IκB-α分离,IκB-α可以结合活化的NF-κB抑制炎症[32]。NO是一种高活性氧化剂,在肝脏内由肝细胞内由活化的NOS产生,在肝损伤发展到失代偿期后,能够促进iNOS的基因高表达[33]。肝损伤发生时由于肝细胞发生氧化性应激反应,炎性因子大量释放;iNOS是重要的炎症因子,iNOS活动活跃,同时iNOS诱导产生的NO也促进肝脏进一步发生损伤[22]。COX-2也是重要的炎症因子,机体组织在正常状态下不表达,肝损伤出现后由于肝细胞出现损伤,Kupffer细胞被激活,出现大量的COX-2表达及合成,加剧肝脏的炎性损伤[33-34]

莲子生物碱是一类生物碱混合物,包括莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱等多种成分,研究表明莲子生物碱具有有清除自由基作用和抗炎作用,本研究通过动物实验也得到相似的研究结果[35]。AEBLS对CCl4诱导的小鼠肝损伤有较好的预防作用。AEBLS可以降低肝损伤小鼠的肝质量和肝指数;AEBLS还可以下调肝损伤小鼠血清中的AST、ALT、ALP、TG、TC、BUN、NO、MDA水平和上调ALB、SOD、CAT、GSH-Px水平;AEBLS通过其抗炎作用下调肝损伤小鼠血清中的炎症细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平;通过RT-PCR实验进一步证实AEBLS可以有效上调肝损伤小鼠肝组织中Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、CAT、GSH-Px、IκB-α的mRNA表达和下调NF-κB-p65、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达。由此可见,AEBLS对CCl4引发的肝损伤有较好的预防作用,且效果接近于药物水飞蓟素,是一类具有开发利用潜质的活性物质。

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Preventive Effects of Alkaloids Extracted from Ba Lotus Seeds on CCl4-Induced Hepatic Injury in Mice

FENG Xia1, SUN Peng1, YI Ruokun1, PENG Deguang2, ZHAO Xin1,*
(1. Chongqing Engineering Laboratory for Research and Development of Functional Food, Chongqing Engineering Research Center of Functional Food, Chongqing Collaborative Innovation Center for Functional Food, College of Biological and Chemical Engineering, Chongqing University of Education, Chongqing 400067, China; 2. Chongqing Enterprise Engineering Research Center of Ba-lotus Breeding and Deep Processing, Chongqing 400041, China)

Abstract:The aim of this study was to determine the preventive effects of alkaloids extracted from Ba lotus seeds (AEBLS) on CCl4-induced hepatic injury in mice. AEBLS was purifi ed using 732 exchange resin and then orally administered to mice. Afterwards, the mice were injected with CCl4to induce hepatic injury, and liver index, serum biochemical parameters, and the mRNA expression of related genes in hepatic tissue were evaluated. The results showed that AEBLS could reduce liver weight and liver index in mice with hepatic injury. AEBLS could decrease aspartate aminotransferase (AST), aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), triglyceride (TG), total cholesterol (TC), urea nitrogen (BUN), nitric oxide (NO) and malondialdehyde (MDA) levels and increase albumin (ALB), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px) levels of the serum of mice with hepatic injury. Meanwhile, it could also increase serum levels of cytokines such as interleukin-6 (IL-6), IL-12, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interferon-γ (IFN-γ). RT-PCR results also confi rmed that AEBLS could upregulate Mn-SOD, Cu/Zn-SOD, CAT, GSH-Px and IκB-α mRNA expression and downregulate NF-κB-p65, iNOS, COX-2, TNF-α, IL-1β and IL-6 mRNA expression in the liver tissue of mice with hepatic injury. Therefore, AEBLS has a good preventive effect on CCl4-induced hepatic injury, which is close to that of silymarin.

Key words:Ba lotus seed; alkaloid; mRNA expression; liver index; glutathione peroxidase

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717035

中图分类号:TS201.4

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2017)17-0216-07引文格式:

收稿日期:2017-02-12

基金项目:重庆高校创新团队建设计划资助项目(CXTD201601040);

重庆市工程技术研究中心建设项目(cstc2015yfpt_gcjsyjzx0027);重庆第二师范学院校级科研项目(KY201523B)作者简介:冯霞(1976—),女,副教授,硕士,研究方向为食品化学与营养学。E-mail:fengxiacqec@126.com

*通信作者:赵欣(1981—),男,教授,博士,研究方向为食品化学与营养学。E-mail:zhaoxin@cque.edu.cn