复合菌系降解黄曲霉毒素B1的效果及组成多样性研究

赵春霞1,2,王 轶2,程 薇2,吕育财1,龚大春1,郭 鹏2,*

(1.三峡大学生物与制药学院,湖北 宜昌 443002;2.湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所,湖北 武汉 430064)

摘 要:采用“外淘汰法”筛选了一组对黄曲霉毒素 B1(aflatoxin B1,AFB1)具有高效降解能力的复合菌系FBAD-2,该复合菌系在120 h内能将质量浓度为2 000 μg/L的AFB1完全降解,对质量浓度为5 000 μg/L 的AFB1能降解90%。FBAD-2在30~70 ℃的范围内均能保持对AFB1的高效降解能力,其最适温度为60 ℃。毒素降解实验分析表明,FBAD-2对AFB1的降解主要是胞外酶的作用,其最适产酶时间为24 h,此时的胞外粗酶液在48 h内能将5 000 μg/L的AFB1完全降解。16S rDNA基因组测序分析结果表明,FBAD-2的微生物组成主要包括土芽孢杆菌(Geobacillus)、嗜热小杆菌(Symbiobacterium thermopilum)、梭菌(Clostridium)和热厌氧杆菌(Tepidanaerobacter)等。

关键词:黄曲霉毒素B1;生物降解;复合菌系;微生物组成多样性

黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)是一种由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)和镰刀菌属(Fusarium)等真菌产生的一类具有高毒性和强致癌致畸性的次级代谢产物,其中,黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的毒性和危害性最强[1-3]。黄曲霉毒素广泛存在于食品如花生、玉米、谷物及其产品中[4],属于食源性真菌毒素,对人类健康威胁巨大[5]。因而,黄曲霉毒素尤其是AFB1的脱毒研究具有重要意义。

黄曲霉毒素的脱毒方法主要有物理、化学与生物法[6-8],其中,微生物法因其安全、高效的特点逐渐为人们所重视。研究表明,细菌、真菌和酵母等多种微生物对黄曲霉毒素具有脱毒作用[9-11]

目前所报道的微生物多是通过纯培养方式得到,但由于纯培养微生物对生长条件要求苛刻,在实际应用中受到极大的限制。此外,人类能够分离培养的微生物不到自然界微生物的1%[12],很多对黄曲霉毒素具有分解作用的微生物资源在 现有条件下通过纯培养的方法很难获得。崔宗均等[13]在研究天然纤 维素降解时,采用了“外淘汰法”筛选到了一组高效的纤维素降解复合系MC1。“外淘汰法”在不破坏自然界中微生物间的协同关系的前提下,通过限制性培养的方法从环境中定向驯化出目的功能的微生物菌群。采用该种方法得到的复合系具有传统纯培养微生物所难以完成的功能,其在纤维素[14]、石油[15]等复杂化合物的降解方面有独特的优势。本研究采用“外淘汰法”筛选得到了一组对AFB1具有高效降解能力的复合菌系,以期为黄曲霉毒素降解菌剂和酶制剂的开发提供理论与实践参考。

1 材料与方法

1.1 菌种与试剂

复合菌系FBAD-2由湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所实验室筛选驯化。

改良的蛋白胨纤维素培养基(peptone-cellulose solution medium,PCS):0.5%蛋白胨、0.2%酵母粉、0.5% NaCl、0.025%碳酸钙、玉米芯0.5%。

AFB1(纯度99%) 美国J&K公司;甲醇(色谱纯)美国Tedia公司;20 mg/L蛋白酶K 美国Herogen biotech公司;QIA quick Gel Extraction Kit PCR产物试剂盒 德国Qiagen公司;pMD18-T Vector Cloning Kit质粒 日本Takara公司;氨苄青霉素 美国Sigma公司;Safestain DNA染料DNA 美国Herogen Biotech公司;细菌扩增的引物27F和1492R、酶MspⅠ、酶RsaⅠ 美国Thermo公司;超纯水;其余试剂均为分析纯。

黄曲霉毒素储备液制备:将10 mg AFB1的溶于1 mL苯-乙腈(98∶2,V/V)中,用氮吹仪将标准品吹干,然后再溶于10 mL甲醇中,使母液质量浓度为

1 000 μg/mL。使用前稀释至合适质量浓度。

1.2 仪器与设备

LC-20AT高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)系统(配备SIL-20A自动进样器、RF-20AT荧光检测器) 日本岛津公司;T100TM聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)仪美国Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 AFB1降解菌的筛选与驯化

取霉变的玉米芯、秸秆及土壤等混合堆沤发酵物,采用“外淘汰法”筛选得到黄曲霉毒素降解复合菌系FBAD-2,加入终体积分数为20%的甘油,保存于-80 ℃冰箱。

1.3.2 FBAD-2对AFB1的降解能力测定

将1 mL甘油管保存的FBAD-2接种至PCS培养基中,于60 ℃条件下静止培养96 h活化菌种。然后以1%的接种量接种至100 mL的PCS培养基中。添加不同量的AFB1母液,使其终质量浓度为500、1 000、2 000、3 000 μg/L与5 000 μg/L,每组3 个平行。置于60 ℃条件下静置培养,在培养的第0、12、24、48、72、96、120小时取样,测定发酵过程中的生物量、蛋白含量和AFB1的残留量,每次3 个平行。

1.3.3 生物量及蛋白含量的测定

生物量用发酵液在600 nm波长处的光密度表示(OD600nm),以未接菌培养基为对照;将发酵液于10 000×g离心10 min取上清液,用考马斯亮蓝法[16]测其游离蛋白含量,以蒸馏水为空白。

1.3.4 毒素残留量的测定

取1 mL发酵液10 000×g离心10 min取上清液用二氯甲烷萃取3 次,收集下层有机相,用氮吹仪吹干,再用1 mL的甲醇溶解,超声30 min,过0.22 μm的有机膜后置于液相色谱进样瓶中准备上机。

H P L C条件:E 2 5 1 9 1 9 3色谱柱C18,填料为SinoChrom ODS-BP(46 mm×250 mm,5 μm)。流动相:甲醇-水体积比45∶55;流速:1 mL/min;进样量:10 μL;柱温箱:35 ℃;检测器:荧光检测器;激发波长:360 nm;发射波长:440 nm。

1.3.5 温度对FBAD-2降解AFB1的影响

将FBAD-2按1%的接种量接种至PCS培养基中,添加AFB1母液使其终质量浓度为500 μg/L。分别置于30、40、50、60、70 ℃条件下静置培养72 h,取1 mL发酵液测其AFB1残留量。

1.3.6 降解毒素的活性成分

将FBAD-2按1%的接种量接种至PCS培养基中,于60 ℃条件下培养24 h,取2 mL发酵液离心,分别收集上清液和沉淀,上清液过膜(0.45 μm水膜)备用。沉淀用等体积50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 7.4)重悬获得菌体,取出1 mL菌体用3 mg/mL溶菌酶于37 ℃孵育30 min,加入1 mmol/L苯甲基 磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF),超声处理(300 W,超声2 s,停3 s)30 min,10 000×g离心10 min,取上清液获得胞内提取物。分别取800 μL上清液、菌体悬浮液和菌体破碎得到的胞内提取物,加入AFB1使其终质量浓度为500 μg/L。置于60 ℃条件下培养72 h,每组3 个平行,以未经任何处理的发酵液和磷酸盐分别作为未处理组和对照组,测其毒素残留量。

取上清液和胞内提取物分为3 组,分别用1 mg/mL蛋白酶K处理、蛋白酶K与1%十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)联合处理[17],以及未处理作为对照。分别取1 mL的处理组和对照组,添加AFB1使其终质量浓度为500 μg/L,每组3 个平行,置于60 ℃条件下培养72 h,用1 mL二氯甲烷终止反应,测其毒素残留量。

1.3.7 上清液对毒素的降解能力

将TAD按1%的接种量接种至PCS培养基中,在第0、24、48、72、96、216小时各取2 mL培养液离心取上清液,测其游离蛋白含量,并加入AFB1使其终质量浓度为500 μg/L,置于60 ℃条件下培养72 h,测其毒素残留量,每组3 个平行。

取上述实验中毒素降解效果最好时期的菌液获得上清液,加入AFB1,使其工作质量浓度为5 000 μg/L,混匀,分装为1 mL,置于60 ℃培养,定期取样3瓶用1 mL二氯甲烷终止反应,测其毒素残留量。

1.3.8 16S rDNA测序分析FBAD-2的组成多样性

复合菌系FBAD-2活化培养24 h后取样,取培养液10 mL,12 000×g离心10 min,收集细胞沉淀,加入磷酸盐缓冲液(50 mmol/L,pH 7.4)0.5 mL,8 000×g离心20 min,去上清液,沉淀加入Extraction buffer(100 mmol/L Tris-HCl pH 9.0,40 mmol/L乙二胺四乙酸)0.5 mL,Vortex混匀,-20 ℃保存,作为克隆文库构建DNA模板。用细菌基因克隆用通用引物27F和1492R[18]进行PCR。PCR反应的程序:94 ℃ 预变性5 min,94 ℃变性30 s,54 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,共30 个循环,最后72 ℃延伸10 min。PCR产物试剂盒QIA quick Gel Extraction Kit纯化后,连接到质粒pMD18-T Vector Cloning Kit,方法步骤按照试剂盒的说明进行。用100 μg/mL氨苄青霉素抗性筛选法挑选200 个克隆子进行16S PCR,纯化的产物用MspⅠ(酶切位点为5’…C/C G G…3’)和RsaⅠ(酶切位点为5’…G T/A C…3’)进行双酶切,酶切方法按说明书进行,然后继续核酸电泳,用Safestain DNA染料进行染色,跑胶检测,选择条带有差异的60 个克隆子送检武汉擎科创新生物有限公司。DNA序列通过GenBank网站,用BLAST软件进行比对[19]。复合菌系Clone 16S rDNA和参考菌的碱基序列经ClustalX 1.83[20]排序后用Molecular Evolutionary Genetics Analysis 4.0(MEGA 4.0)软件[21]采用邻接法构建系统发育树。

2 结果与分析

2.1 复合菌系的筛选与驯化

将20 g霉变的玉米芯、秸秆和土壤等混合堆沤发酵物加入到含有350 mL灭菌的PCS培养基中,添加AFB1储存液使其终质量浓度为100 μg/L 置于500 mL三角瓶中60 ℃静止富集培养3 d后,充分摇匀,吸取20 mL培养液转入到同样的新鲜培养基中继续培养,培养过程中设置多个重复,培养3 d后测定AFB1残留量,以不加菌液的PCS培养基作为对照。选择降解效果最高的一个重复作为接种菌液按5%的接种量吸取培养液接种到新鲜培养基中进行进一步的筛选和驯化。并及时将菌种用80%的甘油保存于-20 ℃冰箱,长期保存的置于-80 ℃。经过20 次传代筛选和驯化,获得一组对AFB1具有显著分解能力的复合菌系FBAD-2。其第10代和第20代培养3 d后的AFB1HPLC的图谱如图1所示。

图1 HPLC分析检测复合菌系对AFB1的降解
Fig.1 HPLC analysis of the AFB1degrading ability of FBAD-2 before and after passages

2.2 FBAD-2对AFB1的降解能力

图2 FBAD-2对不同初始添加量AFB1的降解能力
Fig.2 Degradation of different initial concentrations of AFB1by FBAD-2

在第0、12、24、48、72、96、120小时取样,测其生物量(图2A),离心取上清液测其游离蛋白含量(图2B)和AFB1的残留量的变化(图2C)。图2D图为120 h时在不同的AFB1初始添加质量浓度的降解率。AFB1影响DNA的合成从而可能影响细胞增殖和蛋白代谢。但从图2A和2B看出,当AFB1的初始添加质量浓度达到5 000 μg/L时,细胞的生长和蛋白的合成没有受到明显的影响。在图2C中,当AFB1与复合菌系共同培养时,不同质量浓度的毒素的降解趋势趋于一致,在前24 h毒素降解缓慢,24 h的降解率均在20%左右。从24~72 h,毒素残留量呈近似直线下降,降解速度达到最大。在72 h时,当AFB1初始添加量500、1 000 μg/L时,AFB1几乎全部降解;初始添加量为2 000 μg/L时AFB1还有极少残留;当质量浓度达到3 000、5 000 μg/L时,AFB1降解率分别为95%和90%。在72 h以后,毒素的降解十分缓慢,趋于停止。在120 h时,终止发酵,此时AFB1的降解率如图2D所示,当AFB1的质量浓度在500、1 000、2 000 μg/L时,降解率将近100%;当AFB1的质量浓度为3 000 μg/L时,降解率仍有95%;当AFB1的质量浓度高达5 000 μg/L,降解率仍然高达90%。由此可知,FBAD-2对AFB1有非常好的降解能力,并且对高质量浓度毒素有很好耐受力。

2.3 FBAD-2的培养温度对AFB1降解的影响

图3 培养温度对FBAD-2降解AFB1的影响
Fig.3 Effect of culture temperature on the degradation of AFB1by FBAD-2

测定在30、40、50、60、70 ℃的培养温度条件下,复合菌系FBAD-2对500 μg/L AFB1的降解率,其结果如图3所示。在30 ℃培养72 h,AFB1的降解率很低,仅为30%,在40~50 ℃,毒素的降解率提高到了70%左右,当培养温度升高至60 ℃时,降解率明显提升到了94%,当温度为70 ℃时,降解率为96%,相比60 ℃时,降解率没有明显提升和降低,因而FBAD-2降解AFB1的最适温度为60 ℃,同时结果表明复合菌系FBAD-2是一组耐高温的复合菌系,在70 ℃高温条件下依然具有对毒素的很强的降解能力。

2.4 降解毒素的活性成分

表1 复合菌系FBAD-2不同成分对AAFFBB1的降解能力
Table1 AAFFBB1degrading capacities of different components from FBAD-2

注:肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。

由图2A所知,复合菌系培养到24 h时细胞生长几乎达到稳定期,此时毒素含量也呈线性下降趋势,所以取24 h的上清液、细胞和胞内提取物,在60 ℃条件下与AFB1共同作用72 h,测其对毒素的降解能力,如表1所示。结果显示发酵液上清液对AFB1的降解效果最好,降解率约为95%,其效果和未经过任何处理的菌液对毒素的降解效果几乎一样;其次是胞内提取物,其对毒素的去除率约为60%;菌体活细胞对毒素也有近一半的去除效果。由此初步判定FBAD-2对AFB1的去除主要是上清液的作用;其次,胞内提取物中也有能降解AFB1的物质。菌体活细胞对毒素也具有一定的去除作用,这可能与细胞细胞壁上的某些成分有关[22-23]

图4 不同处理后的上清和胞内提取物对AFB1的降解能力
Fig.4 AFB1degrading abilities of the supernatants and intracellular extracts after receiving different treatments

将上清液和胞内提取物用蛋白酶K和SDS处理后分别与AFB1作用,结果如图4所示。只用蛋白酶K处理后的上清液和胞内提取物对AFB1的降解率分别从96%下降为80%,从61%下降为47%,表明在上清液和细胞的胞内提取物中降解AFB1的有效活性成分均是蛋白(酶)[24],用蛋白酶K与SDS共同处理后的上清和胞内提取物与AFB1相互作用,其降解效果均甚微。这些结果均表明,复合菌系FBAD-2对AFB1的脱毒作用可能是蛋白(酶)作用的结果[23]。在上清液和细胞提取物与AFB1作用之前,AFB1并没有和FBAD-2相互作用过,因此证明降解AFB1的蛋白是由复合菌系的正常代谢产生而非因诱导而产生的[25]。由于在FBAD-2与毒素作用时,比起细胞分泌的胞外产物,菌体因为死亡或破裂而释放到培养环境中有活性的胞内物质的量少,而且胞内提取物对毒素的降解能力也远不如上清液的效果,因此后续实验将不单独考虑胞内产物对毒素的作用。

2.5 上清液对毒素的降解能力

图5 上清液对AFB1的降解能力
Fig.5 Degradation of AFB1by the supernatant

分别获取菌群FBAD-2培养的第0、24、48、72、96、216小时的上清液,测其蛋白含量,并用该上清液与AFB1作用24 h后测其毒素降解率,如图5A所示。在0~24 h的时间段,蛋白含量上升最快,蛋白含量从初始值40.30 mg/L上升到95.91 mg/L。同时,24 h的上清液对毒素的降解能力也最高,降解能力达到了91%,因而24 h是最适的获取蛋白的时间点。在24~72 h,上清液中的蛋白含量虽有所上升,但上升速度相对缓慢,在72 h蛋白含量达到最大,72 h以后,蛋白含量略有降低,在96 h趋于稳定,蛋白含量约为150 mg/L。虽说后期蛋白含量高,但后期获取的上清液对毒素的降解能力却远不如24 h获取的上清液。48 h的上清液对毒素的降解率仅为61%,72 h的更低,96 h的降解率仅剩56%。后期(216 h)获得的上清液对毒素的降解能力略高于48 h获取的上清液,可能是后期细胞进入衰亡期,细胞因自溶而释放出胞内物,因而后期对毒素的降解作用有可能是胞内产物的作用。

获取FBAD-2培养到24 h的上清液粗酶液,研究其对5 000 μg/L AFB1的降解能力,在72 h内毒素残留量的变化如图5B所示。在前8 h,毒素降解最快,几乎呈直线下降,对毒素的降解达到65%。从8 h以后,毒素降解变慢,在48 h,毒素几乎已经完全降解(检测不到)。

2.6 FBAD-2的组成多样性

对复合菌系FBAD-2构建了16S rDNA Clone文库,通过抗性平板筛选法后得到200 个克隆子,然后经过双酶切选择了有差异的60 个克隆子进行测序。经同源比对后,将这些克隆子分为Clone-1、Clone-3、Clone-6、Clone-9、Clone-23、Clone-42、Clone-49、Clone-50为代表的8 种,通过对FBAD-2的16S RNA在GenBank中的序列比较,构建的系统发育树如图6所示。序列分析结果表明,这8 个克隆子分为如下几类:Clone-50、Clone-3、Clone-6、clone-49是与土芽孢杆菌(Geobacillus)亲缘关系比较接近的属,Clone-1是与小杆菌(Symbiobacterium)比较接近的属,与嗜热小杆菌(Symbiobacterium thermopilum,GenBank编号NR075044)的亲缘性高达99%,Clone-9属于梭菌属(Clostridium),Clone-23属于热厌氧杆菌属(Tepidanaerobacter),Clone-42与一种未培养微生物(FN868407)亲缘最近。

图6 基于16S rDNA的系统发育树
Fig.6 Phylogenetic tree based on 16S rDNA sequence

3 结论与讨论

本实验通过“外淘汰法”得到了一组高效降解AFB1的复合菌系FBAD-2,该复合菌系对中低质量浓度(500~3 000 μg/L)的AFB1在5 d内几乎能完全降解,对于高质量浓度(5 000 μg/L)的AFB1的降解率能达到80%。其上清液粗酶能在48 h将5 000 μg/L的AFB1完全降解。而且,该复合系有很好的热稳定性,在30~70 ℃均有活性,而且在高温条件下(60~70℃)有极高的活性。

该复合系的各组分中,上清液对AFB1的降解作用最为明显,用蛋白酶K和SDS处理后的上清液对AFB1的降解能力明显降低(图4)。Alberts等[24]通过蛋白酶K和SDS的处理证明了红串红球菌(Rhodococcus erythropolis)对AFB1的降解是酶解作用。Guan Shu等[25]也用同样的方法证明了橙色黏球菌(Myxococcus fulvus)中降解AFB1的有效成分是酶或蛋白。在研究FBAD-2降解AFB1的活性成分时,发现盐析粗提后的上清液仍然保留着对AFB1的高降解活性(结果未展示),因而证明了复合菌系对AFB1的降解是酶解作用。在现有关于AFB1降解酶的相关报道中,以氧化作用相关的酶居多[26]。最初是Doyle等[26]发现乳过氧化氢酶能降解AFB1,后来相继发现漆酶[27]、来源于假蜜环菌(Armillariella tabescens)的氧化酶[28]等能降解AFB1。也有研究报道从细菌中提取到与毒素降解相关的酶[29-30]。因此,上清液粗酶混合液中很有可能有某种或者某几种氧化酶与AFB1的降解相关。对上清液中的蛋白组成分析和酶学性质的研究将在后续研究中报道。

现有的报道中降解黄曲霉毒素的菌株大多是通过纯培养的方式筛选得到的,Sangare等[31]筛选到的一株绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa),其对100 μg/L的AFB1的降解率仅为82.8%,远低于本实验的降解水平。Motomura等[27]分离到一株对AFB1有较强分解能力的糙皮侧耳属(Pleurotus ostreatus),其降解的最适温度在25 ℃,降解率可高达近100%,但当温度升至30 ℃时便几乎没有降解活性了。

该复合菌系的测序的结果显示,在培养24 h时复合菌系中含有土芽孢杆菌,已有报道显示该属中有一些嗜热土芽孢杆菌(Geobacillus thermoglucosidasius),能高效降解有机污染物[32],Shimura等[33]曾报道了嗜热芽孢杆菌JF8(thermophilic Bacillus sp. JF8)能降解萘,黄曲霉毒素母体与毒性基团便是萘系物;再者,也有报道称芽孢杆菌属对AFB1有较强的降解能力,且认定是酶(蛋白)的作用[34-36],因此,该菌及其产生的酶可能在AFB1的降解中起关键作用。但复合菌系的功能并不是各单菌功能的简单相加,Megharaj等[37]发现河泥土壤微生物的混合培养物能以降解玉米赤霉烯酮,但是在后续单菌落纯化过程中,得到的纯培养物不具有降解该毒素的能力,他们推断是与毒素降解相关的基因发生了突变或者玉米赤霉烯酮的降解是多种菌协同作用的结果。所以,微生物菌群中各组合菌的功能和相互关系都有待于进一步研究。

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Degradation of Af l atoxin B1by a Microbial Consortium and Its Composition and Diversity

ZHAO Chunxia1,2, WANG Yi2, CHENG Wei2, LÜ Yucai1, GONG Dachun1, GUO Peng2,*
(1. College of Biology and Pharmacy, China Three Gorges University, Yichang 443002, China; 2. Institute of Processing of Agricultural Produce and Nuclear Agricultural Research, Hubei Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430064, China)

Abstract:External elimination method was applied to obtain an efficient aflatoxin B1-degrading microbial consortium, designated FBAD-2. The degradation rates of 2 000 and 5 000 μg/L AFB1by the microbial consortium could reach 100% and 90% within 120 h, respectively. The toxin degradation ability of FBAD-2 was kept at a high level in the range of 30–70 ℃, with an optimal temperature of 60 ℃. The results of AFB1detoxif i cation experiment showed that the extracellular enzymes in the supernatant played a major r ole in the degradation of AFB1. Furthermore, the optimal culture time for enzyme production was 24 h, and the supernatant could completely degrade 5 000 μg/L AFB1within 48 h. 16S rRNA gene clone library analysis showed that FBAD-2 was mainly composed of bacteria from the genera Geobacillus, Symbiobacterium thermopilum, Clostridium and Tepidanaerobacter.

Key words:af l atoxins B1; degradation; bacterial community; microbial composition and diversity

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201709017

中图分类号:X56;Q939.5

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2017)09-0106-07

引文格式:

赵春霞, 王轶, 程薇, 等. 复合菌系降解黄曲霉毒素B1的效果及组成多样性研究[J]. 食品科学, 2017, 38(9): 106-112. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201709017. http://www.spkx.net.cn

ZHAO Chunxia, WANG Yi, CHENG Wei, et al. Degradation of af l atoxin B1by a microbial consortium and its composition and diversity[J]. Food Science, 2017, 38(9): 106-112. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201709017. http://www.spkx.net.cn

收稿日期:2016-11-17

基金项目:公益性行业(农业)科研专项(201303080);武汉市科技人才培育计划晨光计划项目(2015070404010189);武汉市第四批“黄鹤英才计划”项目(武人才[2016]1号);湖北省科技支撑计划项目(2015BBA199);湖北省农业科技创新中心创新团队项目(2015-620-007-001)

作者简介:赵春霞(1991—),女,硕士研究生,研究方向为生物质资源利用与工业微生物。E-mail:zhaochunxia1991@yeah.net

*通信作者:郭鹏(1981—),男,副教授,博士,研究方向为应用微生物。E-mail:gpeng_2008@163.com