酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

韩 青,周丽杰,李智博*,赵前程,祁艳霞

(大连海洋大学食品科学与工程学院,辽宁省水产品加工及综合利用重点实验室,辽宁 大连 116023)

摘 要:以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angio tensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5 种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/mL)、加酶量2.0%、温度65 ℃、时间1.0 h、pH 6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30 ℃、时间2.5 h、pH 7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。

关键词:牡蛎;酶解;血管紧张素转换酶抑制率;Plastein反应

高血压作为一种慢性疾病是导致许多疾病的诱因,如中风、心肌梗塞、心力衰竭、动脉瘤和晚期肾病等 [1],化学合成的血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制药物如卡托普利(IC 5 023 nmol/L)在临床方面具有显著的降压效果 [2],但该类药物通常会导致味觉失调、咳嗽和皮疹等副作用 [3]。人们越来越倾向于通过饮食来调节生理状态,甚至代替药物来防治高血压。ACE抑制肽是血管紧张素转化酶的抑制剂,在该酶的催化作用下,血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ,进而作用于血管平滑肌引发全身微动脉收缩,最终达到降低血压的目的 [4]。食源性ACE抑制肽可以以食品而非药品的形式被人体摄入,符合通过食物来调节生理和防治疾病的理念。目前,研究人员发现食品中含有良好的降血压活性ACE抑制肽,其中豆类 [5]、鱼类 [6]、贝类 [7-8]及各种藻类等 [9-10]都是制备ACE抑制肽的良好原料。

蛋白酶水解法主要通过酶将蛋白质的肽键在不同的地方断裂,酶解得到的多肽序列本质上就是原料蛋白质的氨基酸序列的部分肽片段,其氨基酸序列结构必然会受到原料蛋白质一级结构的限制。因此,单纯通过酶解方法获得活性比较高的ACE抑制肽比较困难。

Plastein反应可以用来修饰生物活性肽,能够将限制性氨基酸结合到多肽中,使氨基酸的组成达到均衡 [11],从而提高蛋白质的生物效价。此外,Plastein反应只需要添加食品级的酶及氨基酸,不会给食品引入有毒有害物质 [12]。因此,Plastein反应修饰完全可以在食源性活性肽的结构改造方面应用。在提高蛋白质的营养价值和功能性质、改善一些水解物的生物活性方面,Plastein反应也发挥了很好的作用,如改善蛋白水解物的ACE抑制活性和抗氧化活性 [13-15]

目前,对Plastein反应修饰的研究已涉及酪蛋白 [16]、豆蛋白 [17-18]、鱼蛋白 [19]、海地瓜等蛋白质 [20-21]的水解产物并且获得了一些高活性且结构新颖的ACE抑制肽。已有研究 [22-24]以酪蛋白、大豆蛋白水解物作为Plastein反应的底物,显著提高了Plastein反应修饰产物的ACE抑制活性、改善了游离自由基清除能力。沈晴晴 [2 0]、朱晓杰 [21]等通过Plastein反应获得了海地瓜ACE抑制肽,不但活性高而且结构新颖。张强等 [25]以对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除能力为指标,经Plastein反应修饰后双孢蘑菇源抗氧化肽对DPPH自由基的清除能力明显增强。通过诸多研究证明,Plastein反应在改善生物活性肽的活性方面存在着很大的潜力。

天然海洋生物多肽是海洋生物资源的重要组成部分,与陆地上天然蛋白质相比,复杂的海洋环境使海洋生物蛋白质结构具有更多功能差异,为制备各种生物活性多肽提供了多种选择性。牡蛎是大连地区的优势贝类之一,其营养丰富,含有多种活性成分 [26-27],目前对牡蛎多肽的开发方面多使用酶解方法,产物活性较低 [28]

因此,本研究旨在探索一种实用、高效的酶解制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽的方法,为其作为天然降血压功能性食品得到开发应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

牡蛎 辽宁省大连市海鲜市场。

木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶(均为食品级) 北京索莱宝公司;ACE、马尿酰组氨酸亮氨酸(hippuryl-L-histidyl-L-leucine,HHL) 美国Sigma公司;甲醇(色谱级) 德国默克公司。其他均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

1260高效液相色谱仪 美国安捷伦公司;高速组织捣碎机 上海标本模型厂;冷冻干燥机 宁波新芝生物科技股份有限公司;90-2低速台式离心机 上海医疗器械(集团)有限公司;RE-52AA旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂;HH-2数显恒温水浴锅 金坛市江南仪器厂;AR224CN电子天平、STARTER2100实验室p H计奥豪斯仪器(上海)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 ACE抑制活性的测定

采用Cushman等 [29]优化的反向-高效液相色谱体外检测方法。水浴锅调37 ℃,在1.5 mL Eppendorf管中分别加入5 μL牡蛎酶解液和15 μL ACE(60 mU/mL),保温5 min,加入25 μL HHL(7.6 mmol/L)反应25 min,最后加10 μL 10%三氟乙酸溶液终止反应。置于高效液相色谱紫外检测器,在228 nm波长处测定吸光度。用超纯水做空白实验。牡蛎酶解液对ACE活性的抑制率计算如式(1)所示:

1.3.2 水解度的测定

总氮含量的测定参照GB 5009.5—2010《食品中蛋白质的测定》凯氏定氮法,利用自动凯氏定氮仪测定酶解液中总氮含量。

游离氨基态氮含量的测定采用甲醛电位滴定法 [30-31]。量取5 mL牡蛎酶解液于烧杯中,加水60 mL,调pH 8.2。开启磁力搅拌器,加入10 mL甲醛溶液,混匀。用浓度为0.05 mol/L(C(NaOH))的NaOH标准溶液滴定至pH值为9.2。记录消耗NaOH标准溶液的体积V 1。同时用水做试剂空白试验,记录消耗NaOH标准溶液的体积V 0。游离氨基态氮含量和水解度计算如式(2)、(3)所示:

1.3.3 游离氨基酸的测定

参照邻苯二甲醛(o-phthalaldehyde,OPA)法,略有改进。OPA试剂的配制:称取40 mg OPA溶解于1 mL甲醇中,分别加入2.5 mL质量分数为20%的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、25 mL浓度为0.1 mol/L的硼砂以及100 μL β-巯基乙醇,最后用蒸馏水定容到50 mL,此试剂使用前即时配制。以L-亮氨酸作出标准曲线,计算水解液中游离氨基酸浓度。

1.3.4 牡蛎酶解工艺优化

1.3.4.1 牡蛎酶解工艺流程

将牡蛎肉去除内脏,按一定料液比进行匀浆,用NaOH或HCl溶液调pH值,酶解后沸水浴灭酶15 min,冷却至室温,调p H 7.0,9 000 r/min离心,取上清液,浓缩,冻干,最后进行指标测定。

1.3.4.2 单酶筛选

本实验以牡蛎肉作为酶解原料,采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解。固定酶解条件为:料液比1∶10(g/mL)、加酶量(酶占底物质量分数)2.0%、酶解时间3 h。取各酶最适温度和pH值(表1)。测定酶解液的ACE抑制率和水解度,选出酶解效果最佳的蛋白酶。

表1 5种蛋白酶降解牡蛎蛋白质的条件
Table 1 Hydrolysis conditions of oyster proteins with five proteases

最适胃蛋白酶木瓜中性胰蛋白酶碱性条件蛋白酶蛋白酶蛋白酶pH 2.0 6.5 6.5 8.0 9.0温度/℃37 55 45 45 45

1.3.4.3 木瓜蛋白酶酶解条件优化

选用木瓜蛋白酶,测定牡蛎酶解液在不同的料液比、加酶量、酶解时间、酶解温度及pH值条件下的ACE抑制率。根据单因素试验结果,设计四因素三水平正交试验,如表2所示。

表2 正交试验因素与水平
Table 2 Factors and their levels used in orthogonal array design

水平因素A料液比(g/mL)B加酶量/%C酶解温度/℃D酶解时间/h 1 1∶5 1.5 45 0.5 2 1∶8 2.0 55 1.0 3 1∶10 2.5 65 1.5

1.3.5 Plastein反应的条件优化

1.3.5.1 反应用酶筛选

通过上述最优条件制备的牡蛎酶解液作为Plastein反应的底物,按2.0%的加酶量将中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶分别加入底物质量分数为40%的牡蛎酶解溶液中,在4 种蛋白酶的最适条件下酶解1.0 h。以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为考察指标选出最适酶。

1.3.5.2 Plastein反应的单因素试验

选用中性蛋白酶作为反应用酶,考察不同底物质量分数、反应温度、加酶量和反应时间对Plastein反应的影响。结束反应后,沸水浴灭酶15~20 min;测定不同修饰程度产物的游离氨基酸减少量及ACE抑制率。固定反应条件为:底物质量分数40%、反应温度50 ℃、pH 7.0、加酶量2.0%、反应时间1.0 h。

1.3.5.3 Plastein反应验证实验

对以游离氨基酸减少量为指标和以ACE抑制率为指标选出的Plastein反应修饰的两组最佳条件进行验证实验,测定酶解产物游离氨基酸减少量和ACE抑制率。并与Plastein反应修饰前的酶解产物作比较。

2 结果与分析

2.1 牡蛎酶解工艺优化结果

2.1.1 单酶筛选结果

图1 不同蛋白酶对水解度和ACE抑制率的影响
Fig. 1 Effects of different enzymes on the degree of hydrolysis and ACE inhibitory activity

将冻干后的酶解液质量浓度定为5 mg/mL。由图1可以看出,胃蛋白酶酶解产物的ACE抑制率55.06%,为最高,其次为木瓜蛋白酶酶解产物的47.31%。两种酶的酶解产物的水解度分别为11.69%和34.07%。综合考虑ACE抑制率和水解度两种因素,选用木瓜蛋白酶进行后续的酶解实验。

2.1.2 单因素试验结果

2.1.2.1 料液比对酶解物ACE抑制率的影响

以ACE抑制率为考察指标,选取不同的料液比(1∶3、1∶5、1∶8、1∶10、1∶15(g/mL)),对牡蛎肉进行酶解,结果见图2,料液比为1∶8时,酶解产物的ACE抑制率最大,达到58.47%,溶剂用量持续增大,抑制率呈下降趋势。因此,将1∶8确定为最适料液比。

图2 料液比对酶解产物ACE抑制率的影响
Fig. 2 Effect of solid-to-liquid ratio on ACE inhibitory activity

2.1.2.2 加酶量对酶解物ACE抑制率的影响

图3 加酶量对ACE抑制率的影响
Fig. 3 Effects of enzyme dosage on ACE inhibitory activity

以ACE抑制率为考察指标,选取不同的加酶量(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%),对牡蛎肉进行酶解,结果见图3,当加酶量为2.0%时ACE抑制率最大,为58.21%,加酶量继续增大,抑制率开始降低。因此,加酶量2.0%为最适条件。

2.1.2.3 酶解温度对酶解物ACE抑制率的影响

图4 酶解温度对ACE抑制率的影响
Fig. 4 Effects of reaction temperature on ACE inhibitory activity

以ACE抑制率为考察指标,选取不同的酶解温度(45、50、55、60、65 ℃),对牡蛎肉进行酶解。由图4可以看出,酶解产物对ACE的抑制率的影响趋势为先上升后降低。温度为55 ℃时抑制率达到最高,为57.5%,说明木瓜蛋白酶在55 ℃条件下酶活性最强,反应速度最快。

2.1.2.4 pH值对酶解物ACE抑制率的影响

以ACE抑制率为考察指标,选取不同p H值(5.5、6.0、6.5、7.0、8.0),对牡蛎肉进行酶解。由图5可以看出,酶解产物在p H 6.0时抑制率最高,为57.18%,当p H值继续升高,抑制率则逐渐下降。因此,p H 6.0确定为最适p H值。

图5 pH值对ACE抑制率的影响
Fig. 5 Effects of initial pH on ACE inhibitory activity

2.1.2.5 酶解时间对酶解物ACE抑制率的影响

图6 酶解时间对ACE抑制率的影响
Fig. 6 Effects of hydrolysis time on ACE inhibitory activity

以ACE抑制率作为考察指标,选取不同的酶解时间(0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h),对牡蛎肉进行酶解。由图6可以看出,随酶解时间延长,酶解产物对ACE抑制率的影响呈先上升后下降的趋势。在1.5 h时抑制率达到最高,为57.83%。1.5 h后抑制率逐渐下降。

2.1.3 正交试验结果

表3 正交试验设计及结果
Table 3 Orthogonal array design with experimental results

试验号A料液比B加C酶解D酶解ACE抑制(g/mL)酶量/%温度/℃时间/h率/% 1 1∶5 1.5 45 0.5 54.21 2 1∶5 2.0 55 1.0 56.32 3 1∶5 2.5 65 1.5 54.68 4 1∶8 1.5 55 1.5 56.53 5 1∶8 2.0 65 0.5 57.37 6 1∶8 2.5 45 1.0 55.52 7 1∶10 1.5 65 1.0 55.61 8 1∶10 2.0 45 1.5 54.74 9 1∶10 2.5 55 0.5 53.10 K 1165.21 166.35 164.47 164.68 K 2169.42 168.43 165.95 167.45 K 3163.45 163.30 167.66 165.95 R 5.97 5.13 3.19 2.77

如表3所示,各因素对牡蛎酶解液ACE抑制率的影响大小次序为料液比>加酶量>酶解温度>酶解时间。最佳酶解工艺为A 2B 2C 3D 2,即料液比1∶8、加酶量2.0%、酶解温度65 ℃、酶解时间1.0 h、pH 6.0。

2.1.4 验证实验结果

将单因素试验最佳条件(料液比 1∶8、加酶量2.0%、酶解温度55 ℃、酶解时间1.5 h、p H 6.0)、正交试验最佳条件(料液比1∶8、加酶量2.0%、酶解温度65 ℃,酶解时间1.0 h、p H 6.0)、正交试验5号(料液比1∶8、加酶量2.0%、酶解温度65 ℃、酶解时间0.5 h、p H 6.0)进行验证,结果如图7所示,正交试验最佳一组ACE抑制率最高,为63.30%,水解度为36.60%。由此可得,本实验的最佳酶解工艺:料液比 1∶8、加酶量2.0%、酶解温度65 ℃、酶解时间1.0 h、 pH 6.0。

图7 验证实验结果
Fig. 7 Experimental verification of optimized hydrolysis conditions

2.2 Plastein反应条件优化结果

2.2.1 反应用酶筛选结果

图8 不同蛋白酶对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响
Fig. 8 Effects of different enzymes on ACE inhibitory activity

将木瓜蛋白酶酶解后的牡蛎酶解液作为Plastein反应的底物,如图8所示,经过中性蛋白酶催化的Plastein反应,其反应修饰产物的ACE抑制率相对于其他3 种蛋白酶较高,达到70.37%,游离氨基酸减少量为0.078 mmol/g。综合游离氨基氨酸减少量和ACE抑制率2 个因素考虑,在后续实验中均采用中性蛋白酶进行Plastein反应。

2.2.2 底物质量分数对Plastein反应的影响

由图9可以看出,底物质量分数对Plastein反应影响显著,在35%~50%范围内,底物质量分数越高,反应体系中游离氨基酸减少量也随之增加,当底物质量分数到达50%时,游离氨基减少量最多。底物质量分数继续增加,反应体系底物的黏度增加,不利于反应的进行,导致游离氨基酸减少量下降。ACE抑制率并没有随着底物质量分数的增加而增加,底物质量分数为4 0%的ACE抑制率最高为7 9.8 8%。此时继续增加底物质量分数,反应体系底物的黏度增加,ACE抑制率反而下降,这可能是由于反应生成长链肽段,导致ACE抑制活性下降。

图9 底物质量分数对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响
Fig. 9 Effects of substrate concentration on the decrease of free amino acids and ACE inhibitory activity

2.2.3 反应温度对Plastein反应的影响

图10 反应温度对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响
Fig. 10 Effects of reaction temperature on the decrease of free amino acids and ACE inhibitory activity

由图10可以看出,反应温度与游离氨基酸的减少量呈正相关。在6 0 ℃时游离氨基减少量达到最高值;温度继续升高导致酶失活,阻碍了Plastein反应的进行,以至于游离氨基酸减少量降低。本实验选用的温度范围为30~7 0 ℃,温度对ACE抑制率的影响总体上呈下降趋势,温度越高,ACE抑制率越低。在30 ℃时,ACE抑制率最高,为77.37%,虽然此温度并不是中性蛋白酶最适酶解温度,但是此时Plastein修饰产物的ACE抑制率最高。

2.2.4 加酶量对Plastein反应的影响

在Plastein反应中,酶起到催化剂的作用。由图11可以看出,加酶量对游离氨基酸减少量的影响较大,中性蛋白酶添加量为4%时与其他添加量之间存在明显差异,尤其与加酶量5%相比,说明Plastein反应中酶也存在饱和现象。因此,中性蛋白酶添加量在4%时,游离氨基酸的减少量最大;而超过4%时,游离氨基酸的减少量明显下降,可能是由于酶已达到饱和。在加酶量为1%~4%范围内,Plastein反应修饰产物的ACE抑制率呈下降势。加酶量在1.0%时,ACE抑制率最高,为76.92%。

图11 加酶量对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响
Fig. 11 Effects of enzyme dosage on the decrease of free amino acids and ACE inhibitory activity

2.2.5 反应时间对Plastein反应的影响

图12 反应时间对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响
Fig. 12 Effects of reaction time on the decrease of free amino acids and ACE inhibitory activity

通过控制反应时间来影响Plastein反应修饰程度,可以得到不同修饰程度的产物。由图12可以看出,随着时间的延长,游离氨基酸减少量总体呈下降趋势,在1.0 h时游离氨基酸减少量达到了最大。在本实验所选取的反应时间范围内,反应时间对ACE抑制率的影响并不大,最终所测得的大约都保持在70%~80%的范围内,波动并不明显。在初始阶段(1~2.5 h)ACE抑制率呈增加趋势,在反应2.5 h时,ACE的抑制率达到最高为78.18%,2.5 h后逐渐下降。

2.2.6 Plastein反应的验证实验结果

将游离氨基酸减少量作为考察指标,得到Plastein反应修饰的最佳条件为底物质量分数50%、加酶量4%、反应温度60 ℃、反应时间1.0 h、p H 7.0,将该组设为第1组;以ACE抑制率为指标得到的Plastein反应修饰的最佳条件为底物质量分数40%、加酶量1.0%、反应温度3 0 ℃、反应时间2.5 h,将该组设为第2组;未进行Plastein反应修饰的酶解液设为第3组;分别测其ACE抑制率及前两组游离氨基酸减少量。

如图13所示,第1组ACE抑制率为7 6.31%,较第3组的63.30%具有显著性差异(P<0.05);第2组的ACE抑制率为82.3 1%,较第3组6 3.30%具有极显著性差异(P<0.01),说明经过Plastein反应修饰,能够有效提高产物ACE抑制活性。但ACE抑制率与游离氨基酸减少量并没有对应关系,也就是说在以ACE抑制率为指标得到的Plastein反应修饰最佳条件下,游离氨基酸减少量并不是最多的,这与徐微等 [24]的研究结果相一致。分析其原因可能是因为在Plastein反应中,发生着缩合和转肽两种反应,在转肽反应中是ACE活性提高的过程,此时游离氨基酸并没有发生聚合,所以游离氨基酸的减少量并不多;而当Plastein反应进行到缩合反应阶段,游离氨基酸的减少量增加,但由于反应生成长的肽段,导致ACE抑制活性有所下降。

图13 Plastein反应的验证实验结果
Fig. 13 Experimental verification of optimized Plastein reaction conditions

3 结 论

通过单酶筛选、单因素试验和正交试验,最终得到酶解制备ACE抑制肽的最佳酶解工艺为料液比1∶8、木瓜蛋白酶加酶量2.0%、酶解温度65 ℃、酶解时间1.0 h、酶解pH 6.0。所得酶解液蛋白水解度为36.60%,质量浓度为5 mg/mL的酶解液ACE抑制率为63.30%。

利用中性蛋白酶对牡蛎酶解液进行Plastein反应修饰,可以显著提高产物的ACE抑制活性。以游离氨基酸减少量作为指标得到的Plastein反应修饰的最佳条件为底物质量分数为50%、加酶量4%、反应温度60℃、反应时间1.0 h、p H 7.0;此条件下游离氨基酸减少量为0.207 mmol/g,ACE抑制率为76.31%。以ACE抑制率为指标得到的最佳反应条件为底物质量分数40%、加酶量1.0%、反应温度30 ℃、反应时间2.5 h,游离氨基酸减少量为0.107 mmol/g,ACE抑制率为82.31%。

利用酶解技术联合Plastein修饰反应处理牡蛎可以获得高活性的ACE抑制肽,为牡蛎高附加值产品的开发提供理论依据。

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Optimized Preparation of ACE Inhibitory Peptides from Oyster by Enzymatic Hydrolysis Coupled with Plastein Reaction

HAN Qing, ZHOU Lijie, LI Zhibo*, ZHAO Qiancheng, QI Yanxia
(Key Laboratory of Aquatic Product Processing and Utilization of Liaoning Province, College of Food Science and Engineering, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China)

Abstract:Angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory peptides from oyster were prepared by the combined use of enzymatic hydrolysis and Plastein reaction. Papain, pepsin, alcalase, neutural protease and trypsin were tested for their efficiencies in hydrolyzing oyster based on ACE inhibitory activity and degree of hydrolysis and it turned out that papain was the optimal choice. The hydrolysis conditions were optimized by one-factor-at-a-time method and orthogonal array design as follows: solid-to-liquid ratio (g/mL), 1:8; concentration of papain, 2.0%; hydrolysis time, 1.0 h; hydrolysis temperature, 65 ℃; and initial pH, 6.0. Under these conditions, the percentage inhibition of ACE activity by oyster hydrolsate was 63.30%. The hydrolysate was modified via the Plastein reaction. Based on ACE inhibitory activity and reduction in free amino acid content, the optimal values of Plastein reaction parameters including the type of enzyme, enzyme dosage, substrate concentration, temperature and reaction time were determined to be papain, 1.0%, 40%, 2.5 h and 30 ℃ for hydrolysis at an initial pH of 7.0, respectively. The modified product showed maximum percentage inhibition against ACE activity of 82.31%, which was increased by 19% compared to that before modification.

Key words:oyster; hydrolysis process; angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activit; Plastein reaction

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201706016

中图分类号:TS254.1

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2017)06-0104-07

引文格式:

韩青, 周丽杰, 李智博, 等. 酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化[J]. 食品科学, 2017, 38(6): 104-110.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201706016. http://www.spkx.net.cn

HAN Qing, ZHOU Lijie, LI Zhibo, et al. Optimized preparation of ACE inhibitory peptides from oyster by enzymatic hydrolysis coupled with Plastein reaction[J]. Food Science, 2017, 38(6): 104-110. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201706016. http://www.spkx.net.cn

收稿日期:2016-06-30

基金项目:国家海洋公益性行业科研专项(201505030-4)

作者简介:韩青(1992—),女,硕士研究生,研究方向为食品生物技术。E-mail:1848275999@qq.com

*通信作者:李智博(1979—),女,副教授,博士,研究方向为食品生物技术。E-mail:zhibo9800@163.com