%0 Journal Article %A 李树 %A 张伟 %A 赵春梅 %T 易错PCR技术定向进化褐藻胶裂解酶Alg-2的分析 %D 2019 %R 10.7506/spkx1002-6630-20180207-100 %J 食品科学 %P 146-151 %V 40 %N 4 %X 为提高褐藻胶裂解酶活力,采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对海洋细菌Tamlana sp. S12中具有代表性的酶组分Alg-2进行体外定向进化。经过2?轮易错PCR及96?孔板发酵筛选,分别获得2?株正突变和2?株负突变菌株,其酶比活力分别是亲本(2?675.2?U/g)的162%、241%、53%、11%。酶的动力学分析显示,正突变株P2-81的Km值比亲本降低50%,而负突变株N2-47的Km值比亲本提高106%,表明突变株对底物的亲和力有极大的上升和下降。基因测序及氨基酸序列分析结果表明,Glu、Thr、Ser、Asp和Tyr对褐藻胶裂解酶活力提高起到正面的积极作用,而Lys的突变起到负面的消极作用,后续人工合成的定点突变则进一步证实Asp和Lys的正/负作用。本研究有助于深入理解褐藻胶裂解酶的催化机制,为后续利用理性设计手段改造褐藻胶裂解酶提供理论参考。 %U https://www.spkx.net.cn/CN/10.7506/spkx1002-6630-20180207-100