%0 Journal Article %A 刘 乐 %A 丁 一 %A 王紫玄 %A 房耀维 %A 王淑军 %A 吕明生 %T 海洋氧化节杆菌KQ11右旋糖苷酶催化位点关键氨基酸 %D 2019 %R 10.7506/spkx1002-6630-20180305-031 %J 食品科学 %P 113-120 %V 40 %N 6 %X 通过同源比对,对来自海洋氧化节杆菌(Arthrobacter oxydans KQ11)的右旋糖苷酶(记作AoDex)催化域及关键氨基酸进行预测,运用定点突变将AoDex催化域418-QTDGIELYKGSTMKNTFFNANDD-440中的5 个氨基酸突变为甘氨酸,获得5 种突变型右旋糖苷酶原核表达载体:pColdIII-KQN-Q418G、pColdIII-KQN-D420G、pColdIII-KQN-E423G、pColdIII-KQN-D439G、pColdIII-KQN-D440G,表达产物分别记为Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex、D440GDex。经过发酵表达,Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex几乎没有酶活力。D440GDex酶活力与AoDex一致;所不同的是,D440GDex在25~40 ℃时的酶活力提高了2~3 倍,最适pH值也从AoDex的5.5变为6.5。数据表明,Q418、D420、E423、D439四个氨基酸残基是AoDex催化域中的关键氨基酸。D440突变为甘氨酸对该酶的性质有较大影响,也表明其不是催化域中的广义碱。本研究表明AoDex的催化机制与糖苷酶49家族是一致的,为AoDex的功能改造提供了理论支持。 %U https://www.spkx.net.cn/CN/10.7506/spkx1002-6630-20180305-031