具纤溶活性菌株ND2的筛选及其纳豆激酶基因的克隆、表达

食品科学 ›› 2006, Vol. 27 ›› Issue (12): 473-478.

具纤溶活性菌株ND2的筛选及其纳豆激酶基因的克隆、表达

胡忠，吴奕瑞，林键，庄东红

汕头大学生物学系；

出版日期:2006-12-15 发布日期:2011-11-23

Screening of Fibrinolytic Enzyme-Producing Strain ND2 and Clone and Expression for the Natto Kinase Gene

HU Zhong, WU Yi-Rui, LIN Jian, ZHUANG Dong-Hong

Biology Department, Shantou University, Shantou 515063, China

Online:2006-12-15 Published:2011-11-23

摘要/Abstract

摘要： 从市售的纳豆制品中分离并纯化出一株具有高效纤溶活性的菌株ND2,经生理生化特性及16SrRNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌。通过正交试验优化菌株ND2的发酵条件,得到ND2产纳豆激酶的最佳条件:氮源-大豆蛋白胨,碳源-淀粉,碳氮比3:1,37℃,pH6.0。经PCR扩增得到825bp的纳豆激酶成熟肽基因,采用pET32a(+)表达载体和BL21(DE3)为宿主菌,在温度为37℃、1‰IPTG浓度下可诱导获得较高表达量的重组纳豆激酶。

关键词: 枯草芽孢杆菌, 纳豆激酶, 基因克隆与表达

Abstract: Strain ND2 with the highest activity of the enzyme was screened from the sale natto, and was characterized as Bacillus subtilis sp. by physiologic and biochemical characteristics and analysis of 16SrRNA sequences. The optimal condition for natto kinase (NK)-fermenting was determined as follow: soybean as nitrogen source, fecula as carbon source, carbon-nitrogen ratio 3:1, 37℃, and pH6.0. The NK gene (825bp) was amplified from strain ND2 through PCR reaction. And SDS PAGE analysis revealed that using the pET32a(+) as expression vector and BL21(DE3) as host strain and cultivating at 37℃ with 1‰ IPTG, recombinant NK protein was highly expressed.

Key words: Bacillus subtilis sp., natto kinase, gene clone and expression

胡忠, 吴奕瑞, 林键, 庄东红. 具纤溶活性菌株ND2的筛选及其纳豆激酶基因的克隆、表达[J]. 食品科学, 2006, 27(12): 473-478.

HU Zhong, WU Yi-Rui, LIN Jian, ZHUANG Dong-Hong. Screening of Fibrinolytic Enzyme-Producing Strain ND2 and Clone and Expression for the Natto Kinase Gene[J]. FOOD SCIENCE, 2006, 27(12): 473-478.

[1]	江君，刘军，杨绍青，马帅，闫巧娟，江正强. 黄杆菌褐藻胶裂解酶的高效表达及其在褐藻寡糖制备中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 145-152.
[2]	郭全友，刘玲，李保国，杨絮，姜朝军. Nisin、ɛ-聚赖氨酸、pH值对虾源枯草芽孢杆菌生长/非生长界面模型构建与评价[J]. 食品科学, 2020, 41(22): 140-147.
[3]	刘彦敏，沈璐，王康，严金平，伊日布斯. 传统大豆发酵食品中纳豆芽孢杆菌的分离及纳豆发酵[J]. 食品科学, 2020, 41(2): 208-214.
[4]	朱俊丰, 刘帅, 赵鹏燕, 赵健, 李佳增, 王天琦, 王丽, 刘宏生. 纳豆枯草芽孢杆菌LNUB236所产纳豆激酶的溶栓活性[J]. 食品科学, 2020, 41(13): 148-159.
[5]	卓怡云，吕婧，刘颖，王子龙，刘曼，梁惠. 纳豆激酶对大鼠酒精性肝损伤的改善效果及免疫调节作用[J]. 食品科学, 2019, 40(7): 156-162.
[6]	赵谋明，邹颖，林恋竹，吴见. 纳豆菌液态发酵荞麦产纳豆激酶及其代谢特性分析[J]. 食品科学, 2019, 40(4): 178-185.
[7]	马帅，杨绍青，刘翊昊，闫巧娟，江正强. 枯草芽孢杆菌壳聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达及其酶解特性[J]. 食品科学, 2019, 40(14): 99-106.
[8]	于平，黄星星，张一舒. 枯草芽孢杆菌ZJS18发酵生产γ-聚谷氨酸培养条件的优化[J]. 食品科学, 2018, 39(22): 87-92.
[9]	赵圣明，赵岩岩，马汉军，何鸿举. 1 株广谱抗菌活性菌株的筛选鉴定及其抗菌蛋白的分离纯化[J]. 食品科学, 2018, 39(2): 170-176.
[10]	赵天惠，张佰清. 耐受性枯草芽孢杆菌的脉冲强光诱变筛选及产酶活力分析[J]. 食品科学, 2018, 39(2): 192-197.
[11]	袁林，曾静，郭建军，郭浩，杨罡，陈俊. 极端嗜热酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达[J]. 食品科学, 2018, 39(18): 100-108.
[12]	高泽鑫，何腊平，刘亚兵，高冰，李翠芹，刘涵玉. 高产纳豆激酶菌株的分离与发酵纳豆过程中生物胺的变化[J]. 食品科学, 2018, 39(14): 185-191.
[13]	陶瑞，史智佳，贡慧，杨震，刘梦. 超声协同诱导剂对枯草芽孢杆菌芽孢致死的作用[J]. 食品科学, 2018, 39(11): 95-100.
[14]	管峰，徐雯钗，袁勇军，张瑞雪，赵思敏，陈秋平. 脉冲强光对枯草芽孢杆菌NG-2灭活机理[J]. 食品科学, 2017, 38(23): 70-74.
[15]	崔青，钱炳俊，姚晓敏，季顺利，鲁飞凤，吴静，张建华. 纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析[J]. 食品科学, 2017, 38(14): 1-8.