食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (10): 31-36.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201710006
聂利波,王占彬,史敦胜,宋洋洋,李 旺
NIE Libo, WANG Zhanbin, SHI Dunsheng, SONG Yangyang, LI Wang
摘要: 目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤 维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从B. subtilis LN 基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷 酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B. subtilis LN 基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B. subtilis LN中,获得重组菌 B. subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37 ℃条件下摇瓶培养,重组菌 B. subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B. subtilis LN提高了115%。
中图分类号: