人工设计短肽PF1和PF2的克隆表达及其对葡萄糖氧化酶活性的影响

doi:10.7506/spkx1002-6630-20211223-271

食品科学 ›› 2022, Vol. 43 ›› Issue (22): 215-220.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20211223-271

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人工设计短肽PF1和PF2的克隆表达及其对葡萄糖氧化酶活性的影响

李传博，鲁明杰，张庆芳，林禹彤，窦少华

（大连大学生命健康学院，辽宁省海洋微生物工程技术研究中心，辽宁大连 116622）

发布日期:2022-12-12
基金资助:
西藏自治区科技厅十四五重大专项（03228003）；辽宁省自然科学基金项目（2014020134）；大连大学博士启动基金项目（2019QL005）

Cloning and Expression of Artificially Designed Peptides PF1 and PF2 and Their Effect on Glucose Oxidase Activity

LI Chuanbo, LU Mingjie, ZHANG Qingfang, LIN Yutong, DOU Shaohua

(Liaoning Marine Microorganism Engineering and Technology Research Center, College of Life and Health, Dalian University, Dalian 116622, China)

Published:2022-12-12

摘要/Abstract

摘要： 人工设计并合成2 条等电点分别为12.01和3.18的短肽PF1、PF2，基因全长均为309 bp。以PF1-F、PF1-R、PF2-F和PF2-R为引物，扩增至pET-30a（＋）载体中进行克隆表达。经Ni-NTA分离纯化得到纯蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Western Blot分析表明：表达出的目的蛋白与预期估算大小一致。纯化后的短肽加入葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）催化作用体系中，表明纯化后的短肽分别使GOD活力提高8.34%和降低6.88%。因此可以说明，人工设计的不同电短肽PF1、PF2可以促进或抑制GOD的催化作用，进一步拓宽GOD在食品发酵和食品保鲜方面的应用范围。

关键词: 葡萄糖氧化酶；带电荷短肽；克隆表达

Abstract: Two short peptides PF1 and PF2 with isoelectric points of 12.01 and 3.18, respectively, were designed and synthesized artificially, with full gene length of 309 bp. Each gene was amplified with two primers, cloned into the pET-30a (+) vector and expressed. The expressed products were purified by Ni-NTA column affinity chromatography. SDS-PAGE and Western blot analysis showed that the expressed target protein was consistent with the expected size. The purified short peptides PF1 and PF2 increased and decreased glucose oxidase (GOD) activity by 8.34% and 6.88%, respectively. Therefore, it could be concluded that artificially designed short peptides with different charges PF1 and PF2 can promote or inhibit the catalytic effect of GOD, and further broaden the application scope of GOD in food fermentation and food preservation.

Key words: glucose oxidase; charged short peptide; cloning and expression

中图分类号:

Q785

李传博，鲁明杰，张庆芳，林禹彤，窦少华. 人工设计短肽PF1和PF2的克隆表达及其对葡萄糖氧化酶活性的影响[J]. 食品科学, 2022, 43(22): 215-220.

LI Chuanbo, LU Mingjie, ZHANG Qingfang, LIN Yutong, DOU Shaohua. Cloning and Expression of Artificially Designed Peptides PF1 and PF2 and Their Effect on Glucose Oxidase Activity[J]. FOOD SCIENCE, 2022, 43(22): 215-220.

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人工设计短肽PF1和PF2的克隆表达及其对葡萄糖氧化酶活性的影响

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