植物乳杆菌G63电转化方法的优化

doi:10.7506/spkx1002-6630-201603033

食品科学

植物乳杆菌G63电转化方法的优化

范璟1，席雪冬2，黄彦3，崔中利3,*

1.东南大学附属第二医院生物治疗中心，江苏南京 210003；2.沈阳农业大学植物保护学院，辽宁沈阳 110866；
3.南京农业大学生命科学学院，农业部农业环境微生物重点开放实验室，江苏南京 210095

出版日期:2016-02-15 发布日期:2016-02-26

Optimization of Electroporation Conditions for Lactobacillus plantarum G63

FAN Jing1, XI Xuedong2, HUANG Yan3, CUI Zhongli3,*

1. Biological Treatment Center, the Second Affiliated Hospital of Medical School of Southeast University, Nanjing 210003, China;
2. College of Plant Protection, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866, China; 3. Key Laboratory of Agricultural Environmental
Microbiology, Ministry of Agriculture, College of Life Sciences, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China

Online:2016-02-15 Published:2016-02-26

摘要/Abstract

摘要：

为获得植物乳杆菌G63高效的电转化方法，本研究从细胞生长状态、细胞弱化剂质量浓度、洗涤液、质粒添加量和电击参数等方面对菌株G63的电转化效率进行优化。结果表明：取菌株G63对数生长中期的细胞制备感受态，以1 g/100 mL甘氨酸作为细胞弱化剂，分别用1 mmol/L MgCl2和30 g/100 mL聚乙二醇1000洗涤细胞，并用30 g/100 mL聚乙二醇1000作为电击液，加入20 μg穿梭质粒，在1.5 kV和400 Ω条件下进行电击，可以获得最高的电转化效率，转化效率达到1.18×103 CFU/μg DNA，满足后续遗传学实验要求。

关键词: 植物乳杆菌, 电转化, 转化效率

Abstract:

The objective of this work was to explore an efficient method for Lactobacillus plantarum G63
electrotransformation. We evaluated the effects of the growth phase, weakening cells, washing buffer, plasmid
DNA concentration and electrical parameters on electroporation efficiency. The results showed that after culture in
MRS medium containing 1 g/100 mL glycine to mid-logarithmic phase, the cells were harvested and washed with
1 mmol/L MgCl2 and 30 g/100 mL PEG1000. The optimal electroporation conditions could be achieved by using 30 g/100 mL
PEG1000 as the electroporation buffer with 20 μg of plasmid DNA added in 80 μL of the cell suspension, and pulsing under
specific conditions (field strength, 1.5 kV; resistance, 400 Ω). The transformation efficiency was 1.18 × 103 CFU/μg DNA
under the optimal conditions, which could meet the requirements for subsequent genetic experiments.

Key words: Lactobacillus plantarum, electroporation, transformation efficiency

中图分类号:

Q785

范璟，席雪冬，黄彦，崔中利. 植物乳杆菌G63电转化方法的优化[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201603033.

FAN Jing, XI Xuedong, HUANG Yan, CUI Zhongli. Optimization of Electroporation Conditions for Lactobacillus plantarum G63[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201603033.

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Optimization of Electroporation Conditions for Lactobacillus plantarum G63

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