食品科学 ›› 2013, Vol. 34 ›› Issue (9): 159-163.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201309033
郝杰清,王帅坤,师 慧,王振伟,孟延发*
HAO Jie-qing,WANG Shuai-kun,SHI Hui,WANG Zhen-wei,MENG Yan-fa*
摘要:
目的:探讨重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的分离纯化过程及其性质。方法:摇瓶发酵得到的粗酶液经Q-Sepharose Fast Flow层析纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)确定其分子质量,用紫外和荧光分光光度计研究其光谱特征。结果:获得GOD的纯品,酶的纯化倍数为1.35倍,酶活回收率为92.7%,天然分子质量为150kD,亚基分子质量为75kD;酶活力在pH5.0~8.0和55℃以下稳定,最适pH值为6.0,最适温度为40℃;以葡萄糖为底物的酶学动力学常数Km值为21.06mmol/L;Hg2+、Ag+、Cu2+、Fe2+对其有强烈的抑制作用;该酶在275nm波长处有最大紫外光吸收,在344nm波长处有最大荧光吸收峰;液体状态下该酶在4℃条件下放置6个月活性没有损失,常温下可保存3~5d。结论:重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶纯化成本低,收率高,有利于大规模纯化,得到的纯品稳定性好,具有较高的利用价值。
中图分类号: