白粿干模拟转基因样品前处理与荧光PCR检测体系的优化

doi:10.7506/spkx1002-6630-201402047

食品科学 ›› 2014, Vol. 35 ›› Issue (2): 243-247.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201402047

白粿干模拟转基因样品前处理与荧光PCR检测体系的优化

张冰1,2，王志纯3，邵碧英1，缪婷玉1，彭娟1，陈文炳1,*

1.福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，福建福州 350003；2.厦门塔斯曼生物工程公司，福建厦门 361023；
3.福建省种子总站，福建福州 350003

收稿日期:2013-07-23 修回日期:2013-12-18 出版日期:2014-01-25 发布日期:2014-02-19
通讯作者: 陈文炳 E-mail:1273495290@qq.com
基金资助:
福建出入境检验检疫局科技计划项目（FK2010-28；FK2013-02）

Pretreatment Optimization of Simulated Rice Cake Samples for Fluorescence Polymerase Chain Reaction to Detect Transgenic Components

ZHANG Bing1,2, WANG Zhi-chun3, SHAO Bi-ying1, MIAO Ting-yu1, PENG Juan1, CHEN Wen-bing1,*

1. Inspection and Quarantine Techonology Center, Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350003, China;
2. Xiamen Tasman Bio-Tech Co. Ltd., Xiamen 361023, China; 3. Fujian Provincial Seed Station, Fuzhou 350003, China)

Received:2013-07-23 Revised:2013-12-18 Online:2014-01-25 Published:2014-02-19
Contact: CHEN Wen-bing E-mail:1273495290@qq.com

摘要/Abstract

摘要：

为提高米制品中转基因成分实时荧光聚合酶链式反应检测的灵敏度与检出率，应用模拟转基因白粿干样品，对影响检测结果的主要因素，包括样品颗粒细度、DNA提取过程中样品在十六烷基三甲基溴化铵裂解缓冲液中温育时间等因素进行优化。结果表明：提取的DNA量在样品颗粒细度与十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间的9 种处理组合间都有极显著差异，其中最优条件为样品颗粒细度＞100 目、十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间＞8 h （过夜）。采用最优前处理组合，样品的主要转基因成分检出限从公认的转基因含量0.01%（m/m）降到0.001%（m/m），检测灵敏度提高10 倍，有效提高了米制品转基因成分检测结果的准确性。

关键词: 米制品（白粿干）, 转基因成分, 实时荧光聚合酶链反应, 检出限

Abstract:

In order to improve the sensitivity and detection limits of transgenic components in rice products, pretreatment
conditions for DNA extraction including sample particle size and hexadecyltrimethylammonium bromide (CTAB) lysis
buffer were optimized using simulated transgenic rice cake samples. The results showed that the content of DNA had
significant differences among 9 treatment combinations of sample particle size and CTAB lysis buffer incubation time. The
content of DNA extracted by the combination of sample particle size larger than 100 mesh and CTAB lysis buffer incubation
time longer than 8 h (overnight) was the highest. The detection limit of major transgenic components in rice cake samples
was reduced from transgenic content of 0.01% (m/m) to 0.001% (m/m), suggesting that the sensitivity of fluorescence
polymerase chain reaction (PCR) was improved by 10 times using the optimal pretreatment. The detection accuracy of
genetically modified components in rice products was effectively improved as well.

Key words: rice products (rice cake), genetically modified ingredients, fluorescence real time-polymerase chain reaction (RT-PCR), limit of detection

中图分类号:

TS213.3

张冰1,2，王志纯3，邵碧英1，缪婷玉1，彭娟1，陈文炳1,*. 白粿干模拟转基因样品前处理与荧光PCR检测体系的优化[J]. 食品科学, 2014, 35(2): 243-247.

ZHANG Bing1,2, WANG Zhi-chun3, SHAO Bi-ying1, MIAO Ting-yu1, PENG Juan1, CHEN Wen-bing1,*. Pretreatment Optimization of Simulated Rice Cake Samples for Fluorescence Polymerase Chain Reaction to Detect Transgenic Components[J]. FOOD SCIENCE, 2014, 35(2): 243-247.

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白粿干模拟转基因样品前处理与荧光PCR检测体系的优化

Pretreatment Optimization of Simulated Rice Cake Samples for Fluorescence Polymerase Chain Reaction to Detect Transgenic Components

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