马红丹1,张丽媛1,赵邯郸1,徐丹丹1,曲 静2,关淑艳1,*,王丕武2,*
MA Hongdan1, ZHANG Liyuan1, ZHAO Handan1, XU Dandan1, QU Jing2, GUAN Shuyan1,*, WANG Piwu2,*
摘要:
为使大豆锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,MnSOD)在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的MnSOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒pNZ8149和经改造的质粒pNZS上,表达载体pNZ-SOD和分泌表达载体pNZS-SOD,将两者分别以电穿孔法转化乳酸乳球菌L. lactis NZ3900,经Elliker琼脂板筛选、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、酶切鉴定正确后,获得的两重组菌株加入Nisin进行诱导表达,对L. lactisNZ3900/pNZ-SOD和L. lactis NZ3900/pNZS-SOD的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和酶活性对比分析。结果显示:L. lactis NZ3900/pNZS-SOD菌株表达SOD总活性约是L. lactis NZ3900/pNZ-SOD菌株的1.6 倍,是L. lactis NZ3900/pNZ8149的13.5倍,且可将表达的约2/3的SOD分泌到胞外,表明经改造的乳酸菌分泌表达系统L. lactis NZ3900/pNZS能够分泌表达SOD,并增强SOD的表达。
中图分类号: