黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201706022

食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (6): 142-146.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201706022

黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

张帅，曹庸，梁晓莹，林婉如

1.肇庆学院化学化工学院，广东肇庆 526061；2.华南农业大学食品学院，广东广州 510642

出版日期:2017-03-25 发布日期:2017-03-28
基金资助:
广东高校国际科技合作创新平台项目（2013gjhz0003）

Purification and Enzymatic Properties of Tannase from Aspergillus niger N5-5

ZHANG Shuai, CAO Yong, LIANG Xiaoying, LIN Wanru

1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Zhaoqing University, Zhaoqing 526061, China; 2. College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Online:2017-03-25 Published:2017-03-28

摘要/Abstract

摘要： 采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化，然后对纯酶性质进行测定。结果显示，黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后，可纯化近20 倍，酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2 kD的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45 ℃，且在25～45 ℃范围内热稳定性良好；酶促反应最适pH值为5.0，且在pH 5.0～5.5范围内酸碱稳定性良好。另外，反应动力学测定结果表明，该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数Km为0.916 mmol/L，最大反应速率vmax为0.877 mmol/（L?min）。

关键词: 单宁酶, 黑曲霉, 纯化, 纯酶, 性质测定

Abstract: The crude tannase from Aspergillus niger N5-5 was purified by hollow fiber membrane ultrafiltration and Sephadex G-150 gel chromatography. The properties of the purified tannase were then determined. The results showed that the tannase from Aspergillus niger N5-5 could be purified about 20 folds with a 23.30% recovery. The enzyme was a 64.2 kD protein with a single peptide chain by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis. The optimal temperature for the enzyme was 45 ℃, and it had good thermostability in the range of 25–45 ℃; the optimal pH value was 5.0, and the enzyme displayed good pH stability in the pH range of 5.0–5.5. In addition, the results of reaction kinetics showed that the Km and vmax values towards the substrate propyl gallate were 0.916 mmol/L and 0.877 mmol/(L·min), respectively.

Key words: tannase, Aspergillus niger, purification, purified enzyme, characterization

中图分类号:

TQ920.1

张帅，曹庸，梁晓莹，林婉如. 黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定[J]. 食品科学, 2017, 38(6): 142-146.

ZHANG Shuai, CAO Yong, LIANG Xiaoying, LIN Wanru. Purification and Enzymatic Properties of Tannase from Aspergillus niger N5-5[J]. FOOD SCIENCE, 2017, 38(6): 142-146.

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Purification and Enzymatic Properties of Tannase from Aspergillus niger N5-5

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