草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

doi:10.7506/spkx1002-6630-20200304-062

食品科学 ›› 2021, Vol. 42 ›› Issue (10): 178-183.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20200304-062

草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

李晨，高柳芳，崔晓东，韩宇航，朱丹旭，李娇

（1.山西大学生命科学学院，山西太原 030006；2.山西大学生物技术研究所，山西太原 030006）

出版日期:2021-05-25 发布日期:2021-06-02
基金资助:
山西省回国留学人员科研资助项目（2020-015）；山西省研究生教育创新项目（2020SY021）；国家自然科学基金青年科学基金项目（31600631）

Affinity Chromatographic Puriﬁcation and Enzymatic Characterization of Trypsin from Grass Carp (Ctenopharyngodon idellus)

LI Chen, GAO Liufang, CUI Xiaodong, HAN Yuhang, ZHU Danxu, LI Jiao

(1. School of Life Science, Shanxi University, Taiyuan 030006, China; 2. Institute of Biochemistry, Shanxi University, Taiyuan 030006, China)

Online:2021-05-25 Published:2021-06-02

摘要/Abstract

摘要： 从草鱼肝胰腺中提取胰蛋白酶，经匀浆、硫酸铵分级沉淀、透析得到胰蛋白酶粗酶液，通过BTI-Sepharose亲和层析一步纯化得到电泳纯的草鱼胰蛋白酶，并进一步研究该胰蛋白酶的酶学性质。结果表明：草鱼胰蛋白酶的分子质量约为27 kDa，米氏常数Km为3.4×10－5 mol/L；最适反应温度为60 ℃，在低于60 ℃条件下稳定；最适pH值为9.5，酸碱耐受范围为pH 6.0～12.0；Ba2＋、Mg2＋、Fe2＋在0～10 mmol/L范围内对该酶具有一定激活作用，而乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、K＋在0～10 mmol/L范围内对该酶有一定抑制作用，EDTA较K＋对酶的抑制作用更明显。

关键词: 草鱼；胰蛋白酶；亲和纯化；酶学性质

Abstract: Trypsin was extracted from the hepatopancreas of grass carps in this study. After homogenization and ammonium sulfate precipitation, crude enzyme solution was prepared by dialysis. Then, trypsin of electrophoretic purity was obtained by BTI-Sepharose affinity chromatography in only one step. The results showed that the molecular mass of the trypsin was about 27 kDa, and the Km was 3.4 × 10-5 mol/L. The optimum reaction temperature of the enzyme was 60 ℃ and it remained stabile at temperatures lower than 60 ℃. Its optimal reaction pH was 9.5, and the pH tolerance range was 6.0–12.0. Ba2+, Mg2+ and Fe2+ all could activate the enzyme in the concentration range of 0–10 mmol/L. EDTA and K+ inhibited the enzyme in the concentration range of 0–10 mmol/L, the former being more effective than the latter.

Key words: grass carp; trypsin; affinity chromatographic purification; enzymatic properties

中图分类号:

TS264.2

李晨，高柳芳，崔晓东，韩宇航，朱丹旭，李娇. 草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质[J]. 食品科学, 2021, 42(10): 178-183.

LI Chen, GAO Liufang, CUI Xiaodong, HAN Yuhang, ZHU Danxu, LI Jiao. Affinity Chromatographic Puriﬁcation and Enzymatic Characterization of Trypsin from Grass Carp (Ctenopharyngodon idellus)[J]. FOOD SCIENCE, 2021, 42(10): 178-183.

[1]	高向阳. 酿造酱油氨基酸态氮含量和级别的快速检测[J]. , 0, (): 0-0.
[2]	刘兵常远王瑞芳刘子轩陈海涛张宁. 葱属植物中挥发性风味物质研究进展[J]. 食品科学, 0, (): 0-0.
[3]	周梦月邢冉冉王楠葛毅强陈颖. 六种食用香辛料基因组DNA提取方法的比较[J]. , 0, (): 0-0.
[4]	李文亚班雨函于宏伟马爱进桑亚新孙纪录. 基于GC-MS的低盐虾酱低温发酵过程中的代谢组学分析[J]. 食品科学, 0, (): 0-0.
[5]	阮志强董玺梅蒋雪薇邹世东杨俊文张伟吴灿方勤军. 高盐稀态酱油发酵优势真菌与风味物质相关性分析[J]. 食品科学, 0, (): 0-0.
[6]	邹谋勇何理琴孙启星朱新贵. 产4-乙基愈创木酚酵母的鉴定及其在酱油中的应用[J]. , 0, (): 0-0.
[7]	邹谋勇，何理琴，孙启星，朱新贵. 产4-乙基愈创木酚酵母的鉴定及其在酱油中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 138-144.
[8]	李雄波邓维琴李恒范智义胡廷李洁芝周志帅陈功. 分段发酵模式对郫县豆瓣甜瓣子发酵过程中微生物及产品品质的影响[J]. , 0, (): 0-0.
[9]	李文亚刘洋李宁郑晓卫桑亚新孙纪录. 蛋白酶制剂对虾酱发酵过程中理化性质和微生物区系的影响[J]. , 0, (): 0-0.
[10]	李晨高柳芳朱丹旭. 草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质[J]. , 0, (): 0-0.
[11]	马艳莉，段哲，梁静静，李素萍，丁玉峰. 腐乳丁酸及产丁酸菌发酵特性分析[J]. 食品科学, 2021, 42(10): 58-64.
[12]	李雄波，邓维琴，李恒，范智义，李洁芝，陈功. 分段发酵模式对郫县豆瓣甜瓣子发酵过程中微生物及产品品质的影响[J]. 食品科学, 2021, 42(10): 65-72.
[13]	李文亚，刘洋，李宁，郑晓卫，桑亚新，孙纪录. 蛋白酶制剂对虾酱发酵过程中理化性质和微生物区系的影响[J]. 食品科学, 2021, 42(10): 184-192.
[14]	马艳莉段哲梁静静李素萍丁玉峰. 腐乳丁酸含量及丁酸梭菌发酵特性研究[J]. 食品科学, 0, (): 0-0.
[15]	吴博华，蒋雪薇，张金玉，阮志强，梁胜男，陈永发，周尚庭. 促酱醪发酵芽孢杆菌的筛选及应用[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 134-141.

草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

Affinity Chromatographic Puriﬁcation and Enzymatic Characterization of Trypsin from Grass Carp (Ctenopharyngodon idellus)

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