刺参酸性磷酸酯酶的分离纯化及部分性质研究

食品科学 ›› 2008, Vol. 29 ›› Issue (10): 440-443.

刺参酸性磷酸酯酶的分离纯化及部分性质研究

杨立红, 孙振兴, 王晓洁, 冯培勇, 王莹莹

鲁东大学生命科学学院；

出版日期:2008-10-15 发布日期:2011-12-08

Purification and Characterization of Acid Phosphatase from Apostichopus japonicus

YANG Li-Hong, SUN Zhen-Xing, WANG Xiao-Jie, FENG Pei-Yong, WANG Ying-Ying

School of Life Sciences,Ludong University,Yantai 264025,China

Online:2008-10-15 Published:2011-12-08

摘要/Abstract

摘要： 以刺参内脏为原料提取一种酸性磷酸酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一酶带。该酶紫外最大吸收峰波长为220nm和280nm,荧光发射波长在300nm处,激发峰为306.3nm和606.3nm,等电点为4.2,该酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)最适pH值为4.4,最适温度为45℃,酶促反应初速度为0.2591μmol/min,米氏常数Km值为0.816×10-4mol/L。重金属Hg2+、Ag+、Cd2+和Pb2+对该酶有明显的抑制作用,其中Hg2+对该酶的抑制作用最强,抑制程度依次为:Hg2+>Ag+>Pb2+>Cd2+。

关键词: 刺参, 酸性磷酸酯酶, 分离纯化与性质

Abstract: The acid phosphatase (E.C.3.1.3.2) was purified from Apostichopus japonicus by following procedures: ammonium sulfate fraction precipitation,ammonium sulfate precipitation and gelfiltraction chrcmatography on Sephadex G-200. The purified acid phosphatase shows a single electrophoretic band on PAGE pattern. The enzyme has a maximum absorption peak at 220 nm and 280 nm respectively and its fluorescence emission wavelength is 300 nm and its fluorescence excitation wavelengths are 306.3 nm and 606.3 nm. The isoelectric point is 4.2. The optimum pH of the acid phosphatase is 4.4 when pNPP is used as substrate and the optimum temperature is 45 ℃. The initial velocity is 0.2591μmol/min and the Michaelis-Menten kinetics (Km) is 0.816 ×10-4 mol/L. The heavy metal ions,such as Hg2+,Ag+,Cd2+ and Pb2+ inhibit the activity of the enzyme obviously,and the order is: Hg2+>Ag+>Pb2+>Cd2+.

Key words: Apostichopus japonicu, sacid phosphatase, separation and purification, characterization

杨立红, 孙振兴, 王晓洁, 冯培勇, 王莹莹. 刺参酸性磷酸酯酶的分离纯化及部分性质研究[J]. 食品科学, 2008, 29(10): 440-443.

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