古细菌-硫细菌蛋白AF1514的纯化及晶体生长研究(英文)

食品科学 ›› 2008, Vol. 29 ›› Issue (9): 338-343.

古细菌-硫细菌蛋白AF1514的纯化及晶体生长研究(英文)

帕孜来提·拜合提, 刘志杰, 阿不都拉·阿巴斯

新疆大学生命科学与技术学院；中国科学院生物物理研究所结构与分子生物学中心；

出版日期:2008-09-15 发布日期:2011-12-08

Study on Purification and Crystallization of Hypothetical Protein AF1514 from Archeoglobus fulgidus

PA Zi-Lai-Ti-·Bai-He-Ti, LIU Zhi-Jie, A Bu-Du-La-·A-Ba-Si

1.College of Life Science and Technology,Xinjiang University,Urumqi 830046,China; 2.National Laboratory of Biomacromolecules,Institution of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China

Online:2008-09-15 Published:2011-12-08

摘要/Abstract

摘要： 本研究将AF1514蛋白的重组基因转化到大肠杆菌(E.coli BL21)并通过在12℃条件下的诱导表达产生了大量的目的蛋白。用镍柱亲和层析和分子筛Superdex-75凝胶过滤层析的两步蛋白纯化方法进一步纯化蛋白AF1514后,获得纯度较高的蛋白(纯度>95%)。纯化的母体蛋白和甲基化处理后的蛋白衍生物分别用悬滴汽相扩散法在16℃结晶。初步筛选所用的400多种结晶条件中,适合晶体生长的条件只有3种,其中最佳晶体生长条件溶液的成分包含0.1mol/L醋酸钠,pH5.0,0.1mol/L氯化钠和8%～14%(W/V)2-甲基2,4-戊二醇。蛋白晶体属于四方晶系,初步X-射线衍射分辨率为2.09A0。

关键词: 古细菌硫细菌, 蛋白AF1514, 晶体生长, 纯化

Abstract: Archeoglobus fulgidus DSM 4304 genome was transformed and overproduced in Escherichia coli (E. coli BL21)at 12 ℃ and the protein was purified to 95% purity by Ni2+-affinity column and Superdex-75 gel filtration. Crystals ative and methylated proteins were obtained by the hanging-drop vapour-diffusion method at 16 ℃ under three conditions among the wide range of screened conditions (>400), but principally from the solution containing 0.1mol/L sodium acetate pH 5.0, 0.1mol/L sodium chloride, and 8%～14% (W/V) 2-methyl-2,4-dipentaneol (MPD). The crystal is tetragonal in shape and diffraction data to 2.09A0 are detected by X-ray detector.

Key words: , Archeoglobus fulgidus； protein AF1514； crystallization； purification；

帕孜来提·拜合提, 刘志杰, 阿不都拉·阿巴斯. 古细菌-硫细菌蛋白AF1514的纯化及晶体生长研究(英文)[J]. 食品科学, 2008, 29(9): 338-343.

PA Zi-Lai-Ti-·Bai-He-Ti, LIU Zhi-Jie, A Bu-Du-La-·A-Ba-Si. Study on Purification and Crystallization of Hypothetical Protein AF1514 from Archeoglobus fulgidus[J]. FOOD SCIENCE, 2008, 29(9): 338-343.

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