河南华溪蟹金属硫蛋白分泌型表达载体的构建、表达及纯化

doi:10.7506/spkx1002-6630-201417026

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建河南华溪蟹金属硫蛋白（metallothionein，MT）分泌型表达载体并诱导其可溶表达。方法：采用基因重组技术，将河南华溪蟹MT基因亚克隆至碱性磷酸盐启动子（alkaline phosphatase promoter，phoA）分泌型原核表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），通过低磷酸盐诱导重组蛋白表达，经Ni2+螯合柱分离纯化后，利用紫外光谱扫描分析、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）及Western blotting检测鉴定重组MT。结果：phoA-MT分泌型表达载体构建成功，工程菌经低磷酸盐诱导后重组MT以可溶形式获得表达，紫外光谱扫描和Western blotting证实表达产物的正确性，SDS-PAGE分析其纯度较高，主要以单体和二聚体的形式存在，其分子质量分别约为7.5、15 kD。结论：成功实现了河南华溪蟹MT的重组表达。

关键词: 河南华溪蟹, 金属硫蛋白, 表达

Abstract:

In this research we aimed to obtain soluble metallothionein (MT) of Sinopotamon henanense. Therefore, a
recombinant phoA plasmid containing MT open reading frame fused with a 6×His tag was constructed. The plasmid
possessed the promoter and signal sequence of the alkaline phosphatase gene of Escherichia coli. Subsequently, the
recombinant phoA-MT vector was transformed into E. coli BL21 (DE3) strain for MT expression. The fusion protein
induced by a low concentration of phosphate was purified by Ni2+ affinity chromatography and analyzed by UV absorption
spectrometry, SDS-PAGE and Western blotting. The results demonstrated that fusion protein was expressed with high purity
as a monomer and a dimmer, with molecular weight of approximately 7.5 and 15 kD, respectively.　

Key words: Sinopotamon henanense, metallothionein, expression

中图分类号:

Q786

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河南华溪蟹金属硫蛋白分泌型表达载体的构建、表达及纯化

Expression of Secreted Metallothionein of Sinopotamon henanense Using Alkaline Phosphatase Promoter (phoA) and Signal Sequence in Escherichia coli

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