3 种食源性致病菌Tem-PCR检测方法的建立

doi:10.7506/spkx1002-6630-201604033

食品科学

3 种食源性致病菌Tem-PCR检测方法的建立

刘忠梅1，徐义刚1，曲敏2，莫春生2，刘新亮1，李苏龙1,*

1.黑龙江出入境检验检疫局，黑龙江哈尔滨 150001；2.哈尔滨商业大学食品工程学院，黑龙江哈尔滨 150076

出版日期:2016-02-25 发布日期:2016-02-23
通讯作者: 李苏龙
基金资助:
公益性行业（质检）科研专项（201310126）

Development of Target-Enriched Multiplex PCR Assay for Simultaneous Detection of Three Foodborne Pathogens

LIU Zhongmei1, XU Yigang1, QU Min2, MO Chunsheng2, LIU Xinliang1, LI Sulong1,*

1. Heilongjiang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Harbin 150001, China;
2. College of Food Engineering, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China

Online:2016-02-25 Published:2016-02-23
Contact: LI Sulong

摘要/Abstract

摘要：

应用靶序列富集多重聚合酶链式反应（target-enriched multiplex-polymerase chain reaction，Tem-PCR）技术建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌3 种食源性致病菌的快速检测方法。分别以金黄色葡萄球菌femA基因、沙门氏菌invA基因和志贺氏菌ipaH基因为靶基因，设计3 对特异性引物，并与通用引物连接组成Tem-PCR引物，通过反应条件优化，建立了Tem-PCR检测方法。结果显示，建立的Tem-PCR方法特异性强，对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的检测灵敏度分别为1.1×103、2×103 CFU/mL和1.2×103 CFU/mL。Tem-PCR检测方法有效地解决了传统多重PCR引物扩增效率不均衡的问题。

关键词: 靶序列富集多重PCR方法, 沙门氏菌, 金黄色葡萄球菌, 志贺氏菌

Abstract:

In this study, a target-enriched multiplex PCR (Tem-PCR) assay for simultaneous detection of Salmonella,
Staphylococcus aureus and Shigella was developed. Based on the S. aureus femA gene, the Salmonella invA gene and
the Shigella ipaH gene, three pairs of specific primers together with a universal primer were designed. Following the
optimization of reaction conditions, the Tem-PCR assay was successfully established. Results showed that the Tem-
PCR assay was highly specific to the target bacteria with a sensitivity of 1.1 × 103 CFU/mL, 2 × 103 CFU/mL and
1.2 × 103 CFU/mL for Salmonella, S. aureus and Shigella, respectively. The Tem-PCR assay can effectively improve the
balance of amplification efficiencies of the primers employed in traditional multiplex PCR.

Key words: Tem-PCR assay, Salmonella, Staphylococcus aureus, Shigella

中图分类号:

Q789
R155.5

刘忠梅，徐义刚，曲敏，莫春生，刘新亮，李苏龙. 3 种食源性致病菌Tem-PCR检测方法的建立[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201604033.

LIU Zhongmei1, XU Yigang1, QU Min2, MO Chunsheng2, LIU Xinliang1, LI Sulong1,*. Development of Target-Enriched Multiplex PCR Assay for Simultaneous Detection of Three Foodborne Pathogens[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201604033.

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