食品科学 ›› 2024, Vol. 45 ›› Issue (2): 41-47.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20230403-013
严茹雪,李越,牛家峰,陆兆新,孟凡强,朱萍,吕凤霞
出版日期:
2024-01-25
发布日期:
2024-02-05
基金资助:
YAN Ruxue, LI Yue, NIU Jiafeng, LU Zhaoxin, MENG Fanqiang, ZHU Ping, LÜ Fengxia
Online:
2024-01-25
Published:
2024-02-05
摘要: 本研究实现了脱氧雪腐镰刀菌烯醇解毒酶DepB在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)RIK 1285中的异源表达,但DepB较低的发酵水平限制了其在食品加工和饲料中的应用,可采用转录和翻译相结合的策略提高DepB在枯草芽孢杆菌中的表达水平。首先,选择9 个单启动子替换原始启动子P43,其中单启动子PspoVG介导的重组菌经发酵后酶活力最高,酶活力为29.59 U/mL。其次,选择4 个具有较高DepB表达水平的启动子(P43、PsacB、PspoVG和PaprE)构建16 个双启动子系统,其中,DepB在双启动子PaprE-PspoVG的介导下活力达到最高,为48.87 U/mL。此外,通过对启动子PaprE-PspoVG的核心区域(-35和-10区)进行优化,Mutant-5酶活力高达69.17 U/mL,是原始菌株(14.45 U/mL)的4.79 倍。在此基础上,通过优化启动子PspoVG的核糖体结合位点序列,进一步提高了DepB的表达水平,RBS15酶活力为115.15 U/mL,是原始菌株的7.97 倍。研究结果表明,转录和翻译相结合策略是提高重组蛋白发酵水平的有效手段。
中图分类号:
严茹雪,李越,牛家峰,陆兆新,孟凡强,朱萍,吕凤霞. 基于表达元件优化提高脱氧雪腐镰刀菌烯醇解毒酶DepB在枯草芽孢杆菌中的表达水平[J]. 食品科学, 2024, 45(2): 41-47.
YAN Ruxue, LI Yue, NIU Jiafeng, LU Zhaoxin, MENG Fanqiang, ZHU Ping, LÜ Fengxia. Enhanced Expression of Deoxynivalenol-Degrading Enzyme DepB in Bacillus subtilis by Optimizing Expression Elements[J]. FOOD SCIENCE, 2024, 45(2): 41-47.
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