β-伴大豆球蛋白的提取纯化及多克隆抗体制备

doi:10.7506/spkx1002-6630-20250109-061

食品科学 ›› 2025, Vol. 46 ›› Issue (14): 49-56.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20250109-061

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β-伴大豆球蛋白的提取纯化及多克隆抗体制备

钱周泽，李妍，夏琳枝，梁子仪，安晓敏，郭云霞，郝庆红

（1.河北农业大学生命科学学院，河北?保定 071001；2.河北农业大学华北作物改良与调控国家重点实验室，河北?保定 071001）

发布日期:2025-06-20
基金资助:
河北省自然科学基金项目（C2022204174）；河北省农业联合基金重点项目（C2023204144）；国家绒毛用羊产业技术体系项目（CARS-39-23）

Extraction and Purification of β-Conglycinin and Preparation of Polyclonal Antibodies

QIAN Zhouze, LI Yan, XIA Linzhi, LIANG Ziyi, AN Xiaomin, GUO Yunxia, HAO Qinghong

(1. College of Life Sciences, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China;2. State Key Laboratory of North China Crop Improvement and Regulation, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China)

Published:2025-06-20

摘要/Abstract

摘要： 本研究通过碱溶酸沉法、切向流过滤（tangential flow filtration，TFF）系统对β-伴大豆球蛋白（β-conglycinin，β-CG）进行分离纯化，并制备兔抗β-CG多克隆抗体，通过间接酶联免疫吸附和免疫印迹检测抗体效价及其特异性。采用棋盘滴定法明确最佳抗原包被浓度和抗体稀释度。结果显示，经TFF纯化后，β-CG（α’、α和β亚基）占比96.70%，酸性亚基占比3.30%，2S白蛋白和抑制蛋白被去除。自制兔抗β-CG多克隆抗体可有效结合纯化后的β-CG，抗体特异性良好。最终确定的最佳抗原包被质量浓度为1 μg/mL，最佳抗体稀释度为1∶9 000（V/V）。综上，本研究不仅可为β-CG的提取与纯化提供新的思路，同时也可为今后研究低致敏性β-CG的作用机制、开发低致敏性大豆蛋白产品奠定基础。

关键词: β-伴大豆球蛋白；提取纯化；多克隆抗体；酶联免疫吸附试验

Abstract: In this study, β-conglycinin (β-CG) was extracted and purified through alkali extraction and acid precipitation combined with tangential flow filtration (TFF), and rabbit anti-β-CG polyclonal antibodies were prepared. The antibody titer and specificity were detected by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and western blot (WB), respectively. Checkerboard titration was used to determine optimal antigen coating concentration and antibody dilution. Results showed that the purified product consisted of 96.70% β-CG (α’, α, and β subunits) and 3.30% acidic subunits without 2S albumin or trypsin inhibitors. The prepared rabbit anti-β-CG polyclonal antibodies effectively bound to the purified β-CG with good specificity. The optimal antigen coating concentration and antibody dilution were determined to be 1 μg/mL and 1:9 000 (V/V), respectively. This study not only provides new insights for β-CG extraction and purification, but also lays a foundation for understanding the mechanism of action of hypoallergenic β-CG and developing hypoallergenic soybean protein products.

Key words: β-conglycinin; extraction and purification; polyclonal antibodies; enzyme-linked immunosorbent assay

中图分类号:

TS202.1

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