食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (15): 203-207.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201015044
胡纯秋1,2,高金燕1,3,罗春萍1,2,陈红兵1,2,*,朱 盼1,2
HU Chun-qiu1,2,GAO Jin-yan1,3,LUO Chun-ping1,2,CHEN Hong-bing1,2,*,ZHU Pan1,2
摘要:
为获得重组花生过敏原Ara h 2。通过RT-PCR 合成cDNA,并以此为模板进行PCR 扩增目的基因Ara h 2,扩增产物经纯化后克隆至pMD19-T Simple 载体中,构建重组质粒pMD19-T-Ara h 2。上述重组质粒经酶切纯化后定向克隆到pGEX-4T-1 表达载体中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-Ara h 2,并转化表达宿主菌BL21-codonPlus(DE3)-RIPL 中,经IPTG 诱导表达。SDS-PAGE 电泳结果表明,该表达蛋白大小约为46kD,与理论值相符。通过Glutathione Sepharose 4B 凝胶亲和层析方法纯化融合蛋白GST-Ara h 2,获得融合蛋白纯度约为90%。Western blotting 分析表明,经纯化的融合蛋白能与抗Ara h 2 兔血清发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性。
中图分类号: