重组弹性蛋白酶诱导表达、纯化及酶学特性研究

doi:10.7506/spkx1002-6630-200919052

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (19): 227-231.doi: 10.7506/spkx1002-6630-200919052

重组弹性蛋白酶诱导表达、纯化及酶学特性研究

谷新晰1，许文涛2，黄昆仑2，罗云波2，林希谨2，陈卓君2，田洪涛1 , 2 ,*

1.河北农业大学食品科技学院，河北保定 071001；2. 中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083

收稿日期:2008-10-14 修回日期:2009-07-11 出版日期:2009-10-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 田洪涛 E-mail:xuwentao1111@sina.com;cauxwt@yahoo.cn
基金资助:
国家“863”计划项目(2006AA10Z440)；农业部“948”项目(2007-Z8)

Expression, Purification and Enzymological Properties of Recombinant Elastase

GU Xin-xi1，XU Wen-tao2，HUANG Kun-lun2，LUO Yun-bo2，LIN Xi-jin2，CHEN Zhuo-jun2，TIAN Hong-tao1,2,*

1. College of Food Science and Technology, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China ；
2. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China

Received:2008-10-14 Revised:2009-07-11 Online:2009-10-01 Published:2010-12-29
Contact: TIAN Hong-tao E-mail:xuwentao1111@sina.com;cauxwt@yahoo.cn

摘要/Abstract

摘要：

将已构建好的表达载体pPIC3.5K/PAE转化毕赤酵母KM71，经甲醇诱导表达弹性蛋白酶，通过对发酵条件的初步优化，确定毕赤酵母重组菌株表达的最佳条件为：装填量10％，培养基为BMMY，甲醇浓度为1％。通过DEAE-Sepharose FF弱阴离子交换柱一步纯化，获得良好的纯化效果。该重组蛋白酶最适pH范围为6.0~8.5，最适温度范围为25℃~40℃，催化反应条件温和。Ca2+和Mg2+对重组弹性蛋白酶活性有不同程度的促进作用，Zn2+，Cd2+，Mn2+， Fe2+， Co2+， Cu2+和EDTA对该酶有不同程度的抑制作用。

关键词: 弹性蛋白酶, 诱导表达, 纯化, 酶学特性

Abstract:

Elastase was expressed in Pichia pastoris KM7 with the transformation of a recombinant plasmid pPIC3.5K/PAE encoding a full-length lasB gene of PAE (Pseudomonas aeruginosa elastase) under the induction of methanol. The optimal expression conditions were 1% methanol and 4 d induction. The best purification efficiency was achieved through DEAESepharose FF anion exchange chromatography. The optimal pH and temperature range for catalytic reaction of this elastase were 6.0 8.5 and 25 40 , respectively. Its activity was revealed an enhancement effect from Ca2+ and Mg2+, and an inhibition effect from Zn2+, Cd2+, Mn2+, Fe2+, Co2+, Cu2+ and EDTA.

Key words: elastase, induction, purification , enzymatic property

中图分类号:

谷新晰1，许文涛2，黄昆仑2，罗云波2，林希谨2，陈卓君2，田洪涛1,2,*. 重组弹性蛋白酶诱导表达、纯化及酶学特性研究[J]. 食品科学, 2009, 30(19): 227-231.

GU Xin-xi1，XU Wen-tao2，HUANG Kun-lun2，LUO Yun-bo2，LIN Xi-jin2，CHEN Zhuo-jun2，TIAN Hong-tao1,2,*. Expression, Purification and Enzymological Properties of Recombinant Elastase[J]. FOOD SCIENCE, 2009, 30(19): 227-231.

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Expression, Purification and Enzymological Properties of Recombinant Elastase

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