鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-200901034

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (1): 142-146.doi: 10.7506/spkx1002-6630-200901034

鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

吴序栎，杨志华，刘志刚* ，吴海强

深圳大学过敏反应与免疫学研究所

收稿日期:2007-12-06 修回日期:2008-04-14 出版日期:2009-01-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 刘志刚 E-mail:lzg@szu.edu.cn
基金资助:
国家“863”计划项目(2006AA100308)；广东省科技重点专项项目(2003A3080502)；
深圳市科技计划项目(200326)；深圳大学校科研基金项目(200712)

Gene Cloneing, Expression and Immunological Identification of Main Allergen Gal d 3 in Eggs

WU Xu-li，YANG Zhi-hua，LIU Zhi-gang*，WU Hai-qiang

(Institute of Allergy and Immunology, Shenzhen University, Shenzhen 518060, China)

Received:2007-12-06 Revised:2008-04-14 Online:2009-01-01 Published:2010-12-29
Contact: LIU Zhi-gang E-mail:lzg@szu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的：克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因并检验其免疫活性。方法：提取鸡蛋的总RNA，采用RTPCR方法扩增出目的基因片段，将其克隆入T 载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物，采用RTPCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a 中进行诱导表达。通过Ni2+ 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE 结合活性。结果：克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3。基因开放阅读框为2118 个碱基(包括终止密码子)，编码705 个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5，相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化，用Western blotting 方法检测免疫学活性，目的蛋白具有良好的免疫原性。结论：成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3 基因，该蛋白具有良好的免疫原性。

关键词: 鸡蛋, 过敏原, 基因克隆, 表达, Gal d3

Abstract:

Objective: To clone, express and identify the gene of Gal d 3 in eggs. Methods: The total RNA was extracted from eggs, and the gene of Gal d 3 was amplified by RT-PCR and cloned into pMD18-T for sequencing. Then the interesting gene was subcloned into pET-28a for expression. After purification of the recombinant protein, its IgE-binding capacity was determined by Western blotting. Results: The gene of Gal d 3 in eggs is obtained by clone, which has 2118 bp and encodes 705 amino acids. This isoelectric point of the encoded protein is 6.5 with a molecular weight of 76000. Conclusion: The main allergen gene Gal d 3 in eggs is successfully cloned and expressed in this study, and this recombinant protein shows good IgE-binding capacity.

Key words: eggs, allergen, clone, expression, Gal d 3

中图分类号:

吴序栎，杨志华，刘志刚*,吴海强. 鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定[J]. 食品科学, 2009, 30(1): 142-146.

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鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

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