一株黄色短杆菌基因工程菌株的构建及其L- 缬氨酸积累

doi:10.7506/spkx1002-6630-201023058

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (23): 262-266.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201023058

一株黄色短杆菌基因工程菌株的构建及其L- 缬氨酸积累

徐大庆^1,2，谭延振¹，缪铭¹，王小元¹,*

1.江南大学食品科学与技术国家重点实验室
2. 河北农业大学生命科学学院

收稿日期:2010-04-16 修回日期:2010-11-22 出版日期:2010-12-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 王小元 E-mail:xiaoyuanwang@hotmail.com
基金资助:
国家“863”计划项目(2007AA02Z229；2007AA02Z230)

Construction and L-valine Accumulation of a Genetic Engineering Brevibacterium flavum Strain

XU Da-qing1,2， TAN Yan-zhen1， MIAO Ming1， WANG Xiao-yuan1,*

1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China；
2. College of Life Sciences, Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, China

Received:2010-04-16 Revised:2010-11-22 Online:2010-12-15 Published:2010-12-29
Contact: WANG Xiao-yuan1 E-mail:xiaoyuanwang@hotmail.com

摘要/Abstract

摘要：

从谷氨酸棒杆菌模式菌株C. glutamicum ATCC13032 中克隆出L- 缬氨酸合成途径上的限速酶——乙酰羟酸合酶编码基因ilvBN。对ilvBN 进行定点突变，获得其抗反馈抑制突变型ilvBNr。以大肠杆菌- 黄色短杆菌穿梭表达载体pDXW-10 为基础，构建重组质粒pDXW-10-ilvBNr，并转化野生型黄色短杆菌B. flavum ATCC14067，获得工程菌株ATCC14067/pDXW-10-ilvBNr。3L 罐发酵实验结果显示：在野生型菌株发酵液中检测不到L- 缬氨酸积累，而工程菌株发酵液中L- 缬氨酸积累达5.0g/L。

关键词: 乙酰羟酸合酶, 抗反馈抑制, 黄色短杆菌, 发酵, L - 缬氨酸

Abstract:

As a rate-limiting enzyme for L-valine biosynthesis, the ilvBN gene encoding acetyl-carboxylic acid synthase (AHAS) from Corynebacterium glutamicum ATCC13032 was amplified by PCR, followed by site-direct mutagenesis to obtain an ilvBNr gene, the anti-feedback inhibition gene of ilvBN. The ilvBNr gene inserted into E. coli-Brevibacterium flavum shuttle expression vector pDXW-10 to construct a recombinant plasmid pDXW-10-ilvBNr, which was subsequently transformed into B. flavum ATCC14067, producing a genetic engineering strain ATCC14067/pDXW-10-ilvBNr. The fermentation experiments conducted in a 3 L fermentor showed that no L-valine accumulation was detected in the fermentation broth of the original strain, while an L-valine accumulation of 5.0 g/L was observed in the fermentation broth of the constructed engineering strain.

Key words: acetyl-carboxylic acid synthase, anti-feedback inhibition, Brevibacterium flavum, fermentation, L-valine

中图分类号:

Q851

徐大庆1,2，谭延振1，缪铭1，王小元1,*. 一株黄色短杆菌基因工程菌株的构建及其L- 缬氨酸积累[J]. 食品科学, 2010, 31(23): 262-266.

XU Da-qing1,2， TAN Yan-zhen1， MIAO Ming1， WANG Xiao-yuan1,*. Construction and L-valine Accumulation of a Genetic Engineering Brevibacterium flavum Strain[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(23): 262-266.

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