新霉素ELISA检测方法的建立

doi:10.7506/spkx1002-6630-201114048

食品科学 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (14): 227-231.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201114048

新霉素ELISA检测方法的建立

刘沙洲1,2，桑小雪1，欧阳华学3，雷绍荣3，白林含1,*

1. 四川大学生命科学学院
2.成都市食品药品检测中心 3.四川省农业科学院分析测试中心

出版日期:2011-07-25 发布日期:2011-06-18
基金资助:
四川省公益性研究计划项目(2008NG004)

Development of Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Neomycin

LIU Sha-zhou1,2，SANG Xiao-xue1，OUYANG Hua-xue3，LEI Shao-rong3，BAI Lin-han1,*

(1. School of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610065, China；2. Food and Drug Testing Center, Chengdu 610045, China；3. Analysis and Testing Center, Sichuan Academy of Agricultural Sciences, Chengdu 610066, China)

Online:2011-07-25 Published:2011-06-18

摘要/Abstract

摘要： 目的：比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)的优缺点，建立新霉素残留ELISA检测方法。方法：利用自制的新霉素多克隆抗体，采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留，并比较两种方法的优缺点。结果：新霉素抗血清和庆大霉素的交叉反应率为2.04%，和卡那霉素的交叉反应率为0.02%，和氨苄青霉素、红霉素、四环素的交叉反应率均小于0.01%。初步测试新霉素间接竞争ELISA法的准确性和回收率。板内误差小于4%，板间误差小于11%，回收率为135.5%～191.3%。直接竞争和间接竞争ELISA方法的检测极限分别为28.58ng/mL和51.74ng/mL，达到了国家对新霉素规定的500μg/kg MRL检测限。结论：建立了直接竞争和间接ELISA吸附检测方法，条件优化更成功的间接竞争ELISA可用于开发新霉素检测试剂盒。

关键词: 新霉素, 多克隆抗体, 竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA), 方法建立

Abstract: In this study, we describe the advantages and disadvantages of direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay (dc-ELISA) and indirect competitive ELISA (idc-ELISA) and ELISA methods for the detection of neomycin. Anti-neomycin polyclonal antibodies were prepared and used to detect neomycin by dc-ELISA and idc-ELISA. The cross-reaction rates of prepared anti-neomycin polyclonal antibodies with gentamincin and kanamycin were 2.04% and 0.02%, respectively, and with ampicillin, erythromycin and tetracycline all less than 0.01%. The accuracy and recovery of idc-ELISA were tested with an intra-plate error of less than 4%, an inter-plate error of less than 11% and a recovery between 135.5% and 191.3%. The detection limits of dc-ELISA and idc-ELISA were 28.58 ng/mL and 51.74 ng/mL, respectively, both of which were below the national maximum residue limit (MRL) of 500μg/kg. Therefore, a dc-ELISA method and an idc-ELISA method to detect neomycin have successfully established. Further, the idc-ELISA method where the working conditions were better optimized can be used for the development of neomycin test kit.

Key words: neomycin, polyclonal antibodies, competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), method establishment

中图分类号:

S854

刘沙洲，桑小雪，欧阳华学，雷绍荣，白林含. 新霉素ELISA检测方法的建立[J]. 食品科学, 2011, 32(14): 227-231.

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