鲢鱼卵高分子质量CPI-I 的纯化与鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201213020

食品科学 ›› 2012, Vol. 33 ›› Issue (13): 100-103.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201213020

鲢鱼卵高分子质量CPI-I 的纯化与鉴定

宋川，李艳芳，任阳阳，李树红

四川农业大学食品学院

出版日期:2012-07-15 发布日期:2012-07-27
基金资助:
国家自然科学基金项目(31101249)

Purification and Characterization of High Molecular Weight Caspase Inhibitor CPI-I from Silver Carp Eggs

SONGChuan，LIYan-fang，RENYang-yang，LIShu-hong

(College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya， an 625014, China)

Online:2012-07-15 Published:2012-07-27

摘要/Abstract

摘要： 以鲢鱼卵为材料制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子(CPIs)的粗提浓缩液，进而经Q Sepharose Fast Flow阴离子层析和Sephacryl S-200分子筛层析，获得部分纯化了的CPI-I。以偶氮酪蛋白(azocasein)法监测粗提液及层析纯化中CPIs的抑制活性。层析过程中，以灵敏度更高的荧光合成肽底物(Z-Phe-Arg-MCA)法监测洗脱物的CPIs抑制活性的热稳定性。最终鲢鱼卵CPI-I被纯化了72倍，酶回收率为10.25%。利用Sephacryl S-200分子筛层析Marker标准曲线以及反相酶谱法，初步判断CPI-I的分子质量为89kD。高碘酸-Schiff试剂(PAS)染色法证明该蛋白为糖蛋白。CPI-I能够抑制鲢鱼组织蛋白酶L，且具有显著的热稳定性。

关键词: 鲢鱼卵, 半胱氨酸蛋白酶抑制因子, 纯化, 鉴定

Abstract: In this study, crude extract concentrate from silver carp eggs was prepared and purified by Q Sepharose Fast Flow anionic chromatography and subsequent Sephacryl S-200 molecular sieve chromatography to obtain partially purified casepase inhibitor (CPI) named as CPI-I. Azocasein assay was used to determine the inhibitory activity of crude extract concentrate and CPI-I. In addition, the heat stability of CPI-I activity was evaluated using the fluorescent peptide Z-Phe-Arg-MCA as substrate. The purification factor of CPI-I relative to silver carp egg homogenate was 72, and the recovery rate was 10.25%. Based on the molecular weight standard curve obtained from Sephacryl S-200 molecular sieve chromatography and the results of reverse zymographic analysis, the molecular weight of CPI-I was preliminarily identified as 89 kD. The results of periodic acid-Schiff (PAS) staining demonstrated that CPI-I was a glycoprotein. CPI-I could inhibit cathepsin L from silver carp meat and showed remarkable heat stability.

Key words: silver carp egg, cysteine protease inhibitors, purification, characterization

中图分类号:

TS254.1

宋川，李艳芳，任阳阳，李树红. 鲢鱼卵高分子质量CPI-I 的纯化与鉴定[J]. 食品科学, 2012, 33(13): 100-103.

SONGChuan，LIYan-fang，RENYang-yang，LIShu-hong. Purification and Characterization of High Molecular Weight Caspase Inhibitor CPI-I from Silver Carp Eggs[J]. FOOD SCIENCE, 2012, 33(13): 100-103.

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