瑞士乳杆菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶的分离纯化及酶学性质

doi:10.7506/spkx1002-6630-201317034

食品科学

瑞士乳杆菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶的分离纯化及酶学性质

郭宇星1，祝倩1，朱坤1，周慧敏1，孙杨赢1,2，曾小群1,2，潘道东1,2,*

1.南京师范大学金陵女子学院，江苏南京 210097；2.宁波大学海洋学院，浙江宁波 315211

出版日期:2013-09-15 发布日期:2013-09-27
通讯作者: 潘道东
基金资助:
国家自然科学基金青年科学基金项目(31101314)；江苏省自然科学基金项目(BK2011787)；
江苏省高校自然科学基金项目(13KJB550013)；南京师范大学特聘教授、高层次人才科研启动基金项目(184070H2B08)；
浙江省自然科学基金项目(LQ12C20003)；宁波市科技局创新基金项目(2010C92024)；宁波市自然科学基金项目(2012A610145)

Purification and Characterization of X-Prolyl Dipeptidyl Aminopeptidase from Lactobacillus helveticus

GUO Yu-xing1，ZHU Qian1，ZHU Kun1，ZHOU Hui-min1，SUN Yang-ying1,2，ZENG Xiao-qun1,2，PAN Dao-dong1,2,*

1. Ginling College, Nanjing Normal University, Nanjing 210097, China；
2. School of Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315211, China

Online:2013-09-15 Published:2013-09-27
Contact: PAN Dao-dong

摘要/Abstract

摘要：

提取并纯化瑞士乳杆菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶(Pep X)，并对其酶学性质进行研究。采用超声波破碎瑞士乳杆菌菌体获得含有Pep X的粗酶液，粗酶液经过硫酸铵沉淀、Sephacryl S-300 HR层析、非变性-聚丙烯酰胺凝胶电泳法切胶回收蛋白纯化瑞士乳杆菌Pep X。纯化后Pep X经SDS-PAGE测定分子质量并研究酶学性质。得到电泳纯的Pep X，酶比活力62.24U/mg，单体分子质量大约26kD，最适酶反应pH7.0，最适酶反应温度37℃。Co2+对Pep X有激活作用，Zn2+、Ni2+、Mn2+、Fe3+对Pep X有强烈的抑制作用，金属蛋白酶抑制剂EDTA、丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对Pep X有一定的抑制作用，说明Pep X为金属依赖性的丝氨酸肽酶。

关键词: X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶(Pep X), 纯化, 酶学性质

Abstract:

X-prolyl dipeptidyl aminopeptidase (Pep X) from Lactobacillus helveticus was purified and characterized. The
Pep X was released from Lactobacillus helveticus cells by sonication. The cell-free extract was purified by ammonium
sulfate precipitation, chromatographed on Sephacryl S-300 HR and native-PAGE gel. The molecular mass of purified Pep X
was measured by SDS-PAGE. The specific activity of the enzyme was 62.24 U/mg. The purified Pep X had monomer
molecular mass of approximately 26 kD. Optimal activity was observed at pH 7.0 and 37 ℃. It was activated by Co2+
and inhibited by Zn2+, Ni2+, Mn2+ and Fe3+. It was a metallopeptidase and serine proteinase that was inhibited by EDTA
and PMSF.

Key words: X-prolyl dipeptidyl aminopeptidase (Pep X), purification, enzyme characterization

中图分类号:

TS201.3

郭宇星1，祝倩1，朱坤1，周慧敏1，孙杨赢1,2，曾小群1,2，潘道东1,2,*. 瑞士乳杆菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶的分离纯化及酶学性质[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201317034.

GUO Yu-xing1，ZHU Qian1，ZHU Kun1，ZHOU Hui-min1，SUN Yang-ying1,2，ZENG Xiao-qun1,2，PAN Dao-dong1,2,*. Purification and Characterization of X-Prolyl Dipeptidyl Aminopeptidase from Lactobacillus helveticus[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201317034.

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瑞士乳杆菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶的分离纯化及酶学性质

Purification and Characterization of X-Prolyl Dipeptidyl Aminopeptidase from Lactobacillus helveticus

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