食品科学 ›› 2021, Vol. 42 ›› Issue (12): 99-106.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20200305-072
时旭,刘瑛,史海粟,武俊瑞,乌日娜,牛雪晴,洛雪,岳喜庆
出版日期:
2021-06-25
发布日期:
2021-06-29
基金资助:
SHI Xu, LIU Ying, SHI Haisu, WU Junrui, WU Rina, NIU Xueqing, LUO Xue, YUE Xiqing
Online:
2021-06-25
Published:
2021-06-29
摘要: 为获得高产共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的菌株,对亚油酸异构酶系植物乳杆菌的肌球蛋白交叉反应抗原(myosin-cross-reactive antigen,MCRA)基因mcra和痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因lai-p进行克隆,克隆成功后连接到骨架质粒pCold-SUMO上构建两种含mcra基因和lai-p基因的大肠杆菌重组菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导阳性重组菌蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证得到目的蛋白表达条带,说明两种基因表达成功。采用易错聚合酶链式反应定向进化mcra基因和lai-p基因,构建重组菌突变体库,利用流式细胞术分选获得吸光度提高和CLA产量提高的重组菌株,其中pCold-ycmcra-gfp重组菌243 株,吸光度最高的为155号菌1.050 6±0.000 4,提高了5.02 倍;pCold-yclai-p-gfp重组菌156 株,产量最高的为39号菌(11.62±0.003 6)μg/mL,提高了2.99 倍。本研究为后期深入了解突变菌株CLA产量提高的原因,并获得两种亚油酸异构酶的产酶机制奠定了一定基础。
中图分类号:
时旭,刘瑛,史海粟,武俊瑞,乌日娜,牛雪晴,洛雪,岳喜庆. 定向进化植物乳杆菌和痤疮丙酸杆菌高产共轭亚油酸[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 99-106.
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