食品科学 ›› 2020, Vol. 41 ›› Issue (18): 267-274.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20200315-231
夏丹丹,赵莹莹,马盼盼,王深垒,马常阳,郜晓峰,康文艺
XIA Dandan, ZHAO Yingying, MA Panpan, WANG Shenlei, MA Changyang, GAO Xiaofeng, KANG Wenyi,
摘要: 选取大肠杆菌毒力基因escV、stx2和hlyA为靶标序列构建质粒标准品,快速检测大肠杆菌。通过菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序对所构建的重组质粒进行验证,传15?代测序验证质粒稳定性。制备escV、stx2、hlyA质粒标准品,对标准品进行检测限、均匀性、稳定性和定性实验。然后利用escV、stx2和hlyA质粒标准品对枸杞子中大肠杆菌进行检测。通过菌落PCR和测序结果表明escV、stx2和hlyA标准品制备成功。PCR体系对质粒标准品检测灵敏度达pg级别,并具有特异性,传15?代测序的结果表明质粒标准品具有稳定性。escV、stx2和hlyA质粒标准品检测限分别为3.93×106、2.41×105?拷贝/mL和2.14×105?拷贝/mL,在25、4、-20?℃条件下具有很好的稳定性和性质。escV、stx2和hlyA质粒标准品对34?批枸杞子样品检测,escV、stx2没有被检测出,有3?批枸杞子样品中检测出hlyA(检出率为8.82%)。参考GB?4789.6—2016《食品微生物学检验?大肠菌群计数》方法结合16S?rRNA测序对这3?批枸杞子样品进行检测,结果没有检测出大肠杆菌,说明质粒标准品检测灵敏度高,相较于传统微生物分离鉴定,检出率有了很大的提高。
中图分类号: