食品科学 ›› 2023, Vol. 44 ›› Issue (10): 173-180.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20220609-094
何兴兴,雷静,关文强
出版日期:
2023-05-25
发布日期:
2023-06-02
基金资助:
HE Xingxing, LEI Jing, GUAN Wenqiang
Online:
2023-05-25
Published:
2023-06-02
摘要: 为开发一种双孢蘑菇两种不同形态多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的提取纯化方法,通过温度诱导相分配、分步硫酸铵沉淀盐析、DEAE阴离子交换层析,对双孢蘑菇中的可溶态PPO(soluble PPO,sPPO)和膜结合态PPO(membrane-bound PPO,mPPO)进行分离纯化,并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和Native-聚丙烯酰氨凝胶电泳及米氏方程对纯化后两种形态PPO的纯度、分子质量及酶促反应动力学进行探究。双孢蘑菇sPPO和mPPO经纯化后对邻苯二酚的比活力分别达到6 912.88 U/mg和19 092.94 U/mg,相比于粗酶液,酶的比活力分别提高到12.20 倍和10.86 倍,且纯化后mPPO的比活力显著高于sPPO。酶促反应动力学结果显示,sPPO和mPPO对不同底物的催化活性差异较大,对底物邻苯二酚的催化活性较高,且mPPO比sPPO对底物邻苯二酚的亲和力更强,酶促反应速度更高。sPPO和mPPO对邻苯二酚的最适反应温度均为30 ℃,最适pH值均为6.8。本研究为双孢蘑菇两种状态PPO的质谱鉴定、酶学特性以及抑制酶促褐变的发生等研究奠定了基础。
中图分类号:
何兴兴,雷静,关文强. 可溶态和膜结合态双孢蘑菇多酚氧化酶的分离纯化及酶特性分析[J]. 食品科学, 2023, 44(10): 173-180.
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