食品科学 ›› 2023, Vol. 44 ›› Issue (18): 85-92.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20221206-055
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刘欣欣,王瑶,史红玲,姚伦广,王贤,唐存多
LIU Xinxin, WANG Yao, SHI Hongling, YAO Lunguang, WANG Xian, TANG Cunduo
摘要: 为提高L-苏氨酸脱氢酶(L-threonine dehydrogenase,L-TDH)催化L-苏氨酸脱氢合成L-2-氨基乙酸乙酯效率,通过基因挖掘的手段挖掘出来自大肠杆菌(Escherichia coli)的L-TDH,再借助pACYCDuet-1表达系统将其在E. coli BL21(DE3)中进行可溶性表达及鉴定。结果表明,L-TDH在E. coli BL21(DE3)中实现了高水平的可溶性表达,其裂解液中的酶活力为19.13 IU/mL,约为E. coli BL21(DE3)本底表达水平的79 倍。纯化后的比活力为12.77 IU/mg,它的最适反应温度为45 ℃,最适反应pH值为9.0,在35 ℃和40 ℃保温120 min,残留酶活力仍能达到90%以上。此外,EcTDH动力学参数也优于其他已报道的L-TDH,在转化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪(2,5-dimethylpyrazine,2,5-DMP)的过程中具有更大优势,也为实现转化L-苏氨酸合成2,5-DMP的工业化生产奠定了理论基础。
中图分类号: