大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

食品科学 ›› 2006, Vol. 27 ›› Issue (7): 29-35.

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大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

宋柬, 马会勤, 郝佳, 任发政, 陈尚武

中国农业大学食品科学与营养工程学院教育部-北京市功能乳品重点实验室；中国农业大学农学与生物技术学院果树学系；

出版日期:2006-07-15 发布日期:2011-09-29

Expression and Activity Assay of Recombinant Phenylalanine Ammonia Lyase of Glycine max L. in E.coli

SONG Jian, MA Hui-Qin, HAO Jia, Ren-Fa-Zheng, Chen-Shang-Wu

1.College of Food Science and Nutritional Engineering, Key Laboratory of Functional Dairy, Ministry of Education and Municipal Government of Beijing, Beijing 100083, China;2.Department of Pomology, College of Agronomy and Biotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China

Online:2006-07-15 Published:2011-09-29

摘要/Abstract

摘要： 利用基因重组技术,克隆了大豆(Glycinemax(L.)Merr.)的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)全基因,构建pET-GMPAL工程表达质粒,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,并利用细胞裂解液得到的粗酶液转化L-苯丙氨酸生成肉桂酸。通过8%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,获得了分子量在77.9kD的一条蛋白质特异表达带,特异蛋白质表达量达到总蛋白质含量的8%左右。通过初步发酵,获到具有PAL活性的粗酶液裂解液,粗酶的比活力达到211.7μmol/gpro·min(3529μkat/kg),高于红酵母PAL和欧芹重组PAL表达的比活力。结果表明克隆重组的大豆PAL基因通过表达质粒pET-GMPAL在E.coli中能高效地表达为有催化功能的高活力酶。

关键词: 苯丙氨酸解氨酶(PAL), pET-31b(+), 基因克隆, 重组表达, 肉桂酸

Abstract: Phenylalanine ammonia-lyase(PAL) gene of Glycine max L (GM) was cloned by SOE-PCR method from the genomic DNA. The full length exon of PAL expression vector pET-GMPAL was constructed and expressed in E.coli. Catalytic activity of conversion L-phenylalanine into cinnamic acid by the recombination GMPAL is achieved at high specific activity, up to 211.7μmol/g pro·min (3529μkat/kg), higher than the parsley recombinant PAL, and Rhotodotorula glutins PAL. Molecular weight of the expressed PAL protein was estimated to be 77.9kD. The amounts of PAL protein expression level was 8% of total E.coli soluble proteins by SDS-PAGE. Results indicated that soybean recombinant PAL is efficiently expressed in E.coli as fully activated functional enzyme.

Key words: , phenylalanine ammonia lyase (PAL)； pET-31b(+)； gene cloning； recombinant expression； cinnamic acid； splicing by overlap extention(SOE)； polymerase chain reaction(PCR)；

宋柬, 马会勤, 郝佳, 任发政, 陈尚武. 大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定[J]. 食品科学, 2006, 27(7): 29-35.

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大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

Expression and Activity Assay of Recombinant Phenylalanine Ammonia Lyase of Glycine max L. in E.coli

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