水生栖热菌Thermus aquaticus FL-03嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶基因的克隆及表达

食品科学 ›› 2008, Vol. 29 ›› Issue (12): 389-392.

水生栖热菌Thermus aquaticus FL-03嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶基因的克隆及表达

刘佳欢, 于寒松, 王玉华, 胡耀辉

吉林农业大学食品科学与工程学院；吉林大学植物科学学院；

出版日期:2008-12-15 发布日期:2011-12-08

Cloning and Expression of Thermus aquaticus FL-03 Thermophil Amylomaltase Gene

LIU Jia-Huan, YU Han-Song, WANG Yu-Hua, HU Yao-Hui

1.College of Food Science and Engineering,Jinlin Agricultural University,Changchun 130118,China; 2.College of Plant Science,Jilin University,Changchun 130062,China

Online:2008-12-15 Published:2011-12-08

摘要/Abstract

摘要： 以水生栖热菌FL-03菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增编码嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶的基因(MalQ)片段,克隆至pET-28a(+)原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。重组蛋白经70℃钝化离心除杂蛋白后,经SDS-PAGE检测,可见单一条带。纯化酶液以10%麦芽糖为底物,经TLC法分析表明该酶具有转葡萄糖基的活性,比活力提高近5倍,且活力回收率达70%,具有重要的工业应用前景。

关键词: 水生栖热菌FL-03, 麦芽糖转葡萄糖基酶, 基因克隆, 原核表达, 纯化

Abstract: MalQ gene was amplified by PCR with Thermus aquaticus FL-03 genome DNA,the amplified MalQ gene was cloned into prokaryotic expression vector pET-28a(+) and expressed in BL21(DE3) under induction of IPTG. The expressed product was identified with SDS-PAGE and Western blotting. The amylomaltase was purified by inactivation at 70 ℃ and centrifugalization. The glucanothansferase activity of the purified amylomaltase was identified via TLC method with 10% maltose as substrate. The specific activity is improved 5 folds and the residual activity is 70% after purification. The amylomaltase has great potential in application of various industries.

Key words: Thermus aquaticus FL-03, amylomaltase, genecolone prokaryotic expression, purification

刘佳欢, 于寒松, 王玉华, 胡耀辉. 水生栖热菌Thermus aquaticus FL-03嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶基因的克隆及表达[J]. 食品科学, 2008, 29(12): 389-392.

LIU Jia-Huan, YU Han-Song, WANG Yu-Hua, HU Yao-Hui. Cloning and Expression of Thermus aquaticus FL-03 Thermophil Amylomaltase Gene[J]. FOOD SCIENCE, 2008, 29(12): 389-392.

[1]	项婷，夏琛，刘健华，王超然，沈建福. 蛹虫草中新化合物的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 235-242.
[2]	王伟，李津津，迟海. 解淀粉芽孢杆菌素Amylocyclicin W5的纯化及其抑菌机理[J]. 食品科学, 2021, 42(7): 29-34.
[3]	魏晨业，包晓玮，王娟，何梦梦，曾兰君，张亚涛. 沙棘多糖分离纯化及抗氧化活性[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 227-232.
[4]	胡晓，周雅，陈星星，李来好，杨贤庆，陈胜军，吴燕燕，杨少玲. 罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 63-70.
[5]	高兆建，王秋芬，丁飞鸿，许祥，赵宜峰，焦魏，陈腾. 广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 143-150.
[6]	杨其乐，丁一峰，张宇，聂若男，李亚萌，王佳，王小红. 沙门氏菌噬菌体LPST144尾纤维gp38的序列分析及其结合活性[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 66-73.
[7]	李钰景，孙丽平，庄永亮. 红毛丹果皮中老鹳草素的分离纯化及其热稳定性[J]. 食品科学, 2021, 42(15): 44-49.
[8]	杨汝晴，陈守峰，肖琳琳，陈玉磊，孙乐常，张凌晶，刘光明，曹敏杰. 鲈鱼脯氨酰内肽酶的分离纯化、性质分析及分子克隆[J]. 食品科学, 2021, 42(14): 78-85.
[9]	高兆建，丁飞鸿，陈欢，耿云龙，赵宜峰. 产黄青霉抗真菌几丁质酶的纯化及特性分析[J]. 食品科学, 2021, 42(14): 129-136.
[10]	沙玉欢，毛晓英，吴庆智，张建，程卫东. 核桃分心木黄酮物质的组分及其抗氧化性分析[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 91-98.
[11]	崔晓颖，彭新颜，贺红军，张敏，张晓彤. 芋头多酚氧化酶的分离纯化与酶学特性[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 107-115.
[12]	刘静波，王子秦，于一丁，张婷，刘博群. 豆粕血管紧张素转化酶抑制肽的结构鉴定及作用机制解析[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 123-129.
[13]	高兆建，胡鑫强，宋玉林，丁飞鸿，赵宜峰，陈腾. 解淀粉芽孢杆菌I型耐热普鲁兰酶的纯化及酶特性分析[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 130-137.
[14]	王思琪，胡彦波，翟丽媛，石曾卉，赵珺. 豆渣可溶酸性多糖的分离纯化及结构解析[J]. 食品科学, 2021, 42(10): 52-57.
[15]	陈宏，章骞，陈玉磊，翁凌，张凌晶，谢少浩，刘光明，曹敏杰. 利用牡蛎制备DPP-IV抑制肽及其活性分析[J]. 食品科学, 2021, 42(10): 120-126.