食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (1): 142-146.doi: 10.7506/spkx1002-6630-200901034
吴序栎,杨志华,刘志刚* ,吴海强
WU Xu-li,YANG Zhi-hua,LIU Zhi-gang*,WU Hai-qiang
摘要:
目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因并检验其免疫活性。方法:提取鸡蛋的总RNA,采用RTPCR方法扩增出目的基因片段,将其克隆入T 载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物,采用RTPCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a 中进行诱导表达。通过Ni2+ 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE 结合活性。结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3。基因开放阅读框为2118 个碱基(包括终止密码子),编码705 个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化,用Western blotting 方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3 基因,该蛋白具有良好的免疫原性。
中图分类号: