大肠杆菌中表达Cry1C基因及其重组表达产物的纯化及复性

doi:10.7506/spkx1002-6630-201107045

食品科学 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (7 ): 211-215.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201107045

大肠杆菌中表达Cry1C基因及其重组表达产物的纯化及复性

曹思硕¹，许文涛^1,2，冉文君¹，梁立兴^1，贺晓云²，罗云波¹，元延芳²，黄昆仑^1,2,*

1.中国农业大学食品科学与营养工程学院 2.农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心(北京)

收稿日期:2010-06-03 修回日期:2011-02-25 出版日期:2011-04-15 发布日期:2011-03-30
通讯作者: 许文涛 E-mail:xuwentao1111@sina.com
基金资助:
农业部转基因生物重大专项(2008ZX08011-005;2009ZX08011-001B)

Expression in E. coli, Purification and Refolding of Recombinant Cry1C Gene from Bacillus thuringiensis

CAO Si-shuo1,XU Wen-tao1,2,RAN Wen-jun1,LIANG Li-xing1,HE Xiao-yun2,LUO Yun-bo1, YUAN Yan-fang2,HUANG Kun-lun1,2,

1.College of Food Science and Nutrition Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083,China; 2.Supervision,Inspection and Testing Center of Genetically Modified Food Safety,Ministry of Agriculture,Beijing 100083,China

Received:2010-06-03 Revised:2011-02-25 Online:2011-04-15 Published:2011-03-30
Contact: XU Wen-TAO E-mail:xuwentao1111@sina.com

摘要/Abstract

摘要： 通过PCR方法将苏云金芽孢杆菌Cry1C基因从原始质粒中克隆出来。由于Cry1C基因携带了大量大肠杆菌稀有密码子，因此用PCR方法对其前86个密码子进行修改，以提高其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量。Cry1C蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式大量表达，将包涵体用8mol/L尿素溶解并用His TrapTM FF凝胶柱纯化。所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性折叠，最终得到可溶并有生物活性(由三化螟活性实验验证)的蛋白。Cry1C蛋白纯度可达99.2%。

关键词: 纯化, 复性折叠, Cry1C蛋白, 稀有密码子, 包涵体, 抗虫基因, 表达

Abstract: The Cry1C gene from Bacillus thuringiensis (Bt) was cloned by polymerase chain reaction (PCR). Due to a large number of E. coli low-usage codons in the gene, the first 86 bases were optimized by PCR to improve the expression in E. coli. Cry1C protein was highly expressed in E. coli BL21 as inclusion bodies, which can be dissolved in 8 mol/L urea and purified by His TrapTM FF crude column under denaturing conditions. The purified Cry1C protein was dialyzed against the refolding buffer to obtain a soluble and biologically active protein. Finally, the protein was determined to be 99.2% purity.

Key words: Cry1C protein, rare codon, inclusion body, expression, purification, refolding

中图分类号:

Q344.13

曹思硕，许文涛，冉文君，梁立兴，贺晓云，罗云波，元延芳，黄昆仑. 大肠杆菌中表达Cry1C基因及其重组表达产物的纯化及复性[J]. 食品科学, 2011, 32(7 ): 211-215.

CAO Si-shuo,XU Wen-tao,RAN Wen-jun,LIANG Li-xing,HE Xiao-yun,LUO Yun-bo, YUAN Yan-fang,HUANG Kun-lun1. Expression in E. coli, Purification and Refolding of Recombinant Cry1C Gene from Bacillus thuringiensis[J]. FOOD SCIENCE, 2011, 32(7 ): 211-215.

[1]	项婷，夏琛，刘健华，王超然，沈建福. 蛹虫草中新化合物的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 235-242.
[2]	王伟，李津津，迟海. 解淀粉芽孢杆菌素Amylocyclicin W5的纯化及其抑菌机理[J]. 食品科学, 2021, 42(7): 29-34.
[3]	范明，彭丽桃，闫等，范刚，杨书珍，李杰. VmaH和PMA在指状青霉中的表达及其作为潜在杀菌作用靶点的可能性[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 126-133.
[4]	娄海伟，赵玉，赵逸，林俊芳，赵仁勇，叶志伟，郭丽琼. 蛹虫草转录组分析及类胡萝卜素生物合成相关基因的挖掘[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 150-156.
[5]	王婷，刘婵婵，任娟，荆蓉蓉，钱卫东. 亚硒酸钠促进多形汉逊酵母DL-1合成谷胱甘肽的转录组学分析[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 193-199.
[6]	宋媛，胡秋辉，苏安祥，裴斐，马高兴，马宁，杨文建. 转录组学解析茉莉酸甲酯对双孢蘑菇个体大小的影响机制[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 130-137.
[7]	魏晨业，包晓玮，王娟，何梦梦，曾兰君，张亚涛. 沙棘多糖分离纯化及抗氧化活性[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 227-232.
[8]	胡晓，周雅，陈星星，李来好，杨贤庆，陈胜军，吴燕燕，杨少玲. 罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 63-70.
[9]	杨其乐，丁一峰，张宇，聂若男，李亚萌，王佳，王小红. 沙门氏菌噬菌体LPST144尾纤维gp38的序列分析及其结合活性[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 66-73.
[10]	贾园园，李祥，张振华，张闪，杨露露，唐存多. 重组大肠杆菌全细胞催化D,L-扁桃酸对映选择性制备L-苯甘氨酸[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 83-89.
[11]	林晓彤，董良波，郑俊威，王斌，潘力. 亮氨酸氨肽酶LapA在无孢黑曲霉中的重组表达优化及酶学性质[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 90-96.
[12]	高兆建，王秋芬，丁飞鸿，许祥，赵宜峰，焦魏，陈腾. 广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 143-150.
[13]	赵乐，张晓桐，刘利军，谢水琪，靳奇文，孟祥晨. 氨基酸对植物乳杆菌KLDS1.0391生长及细菌素合成的影响[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 37-44.
[14]	张高川，何超永，王崇龙，王大慧，卫功元. 转录组测序分析氯化钠对普鲁兰生物合成的影响[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 45-50.
[15]	戚英伟，刘悬烁，丁毓端，姜永华，张玉洁，刘佳，蒋紫洮，任小林. 脱落酸处理对苹果成熟、乙烯合成及其信号转导基因表达的影响[J]. 食品科学, 2021, 42(17): 225-232.

大肠杆菌中表达Cry1C基因及其重组表达产物的纯化及复性

Expression in E. coli, Purification and Refolding of Recombinant Cry1C Gene from Bacillus thuringiensis

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价