RT-PCR方法检测贝类中诺沃克样病毒的研究

食品科学 ›› 2008, Vol. 29 ›› Issue (5): 347-351.

RT-PCR方法检测贝类中诺沃克样病毒的研究

张颖, 吴风亮

中国环境管理干部学院生态学系；河北农业大学农村发展学院

出版日期:2008-05-15 发布日期:2011-08-26

Study on Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Norwalk-like Virus in Shellfish

ZHANG Ying, WU Feng-Liang

1.Department of Ecology,Environment Management College of China;2.College of Rural Development,Agricultural University of Hebei

Online:2008-05-15 Published:2011-08-26

摘要/Abstract

摘要： 目的:本研究从病毒富集和核酸提取两方面进行探索,旨在建立一个反转录(RT)PCR技术检测贝类中诺沃克样病毒(NLVs)的方法。方法:利用脊髓灰质炎病毒作为参照毒株,优化了甘氨酸缓冲液-聚乙二醇(PEG)病毒浓缩方法;同时比较了异硫氰酸胍法、SDS-蛋白酶K法、Trizol-异丙醇法、试剂盒法四种RNA提取方法;对市售贝类样品进行了检测,并利用基因测序对阳性样品进行验证。结果:本研究采用的pH9.5甘氨酸缓冲液-16%聚乙二醇病毒浓缩法,病毒的回收率为16.8%,利用Trizol-异丙醇法提取RNA,检出限为8.1×102RT-PCR50/5g贝肉,实际检测贝类样品25件,其中3件样品为阳性,基因测序结果亦证实为阳性。结论:本研究建立了一个灵敏度较高、较为有效的RT-PCR技术检测贝类中诺沃克样病毒的方法。

关键词: 诺沃克样病毒, 反转录PCR, 贝类, 检测

Abstract: Objective:To explore the methods of both virus enrichment and nucleic acid extraction for establishing a Norwalk-like viruses(NL Vs) detection method by RT-PCR.Method:In this study,with poliovirus as the model to optimize glycine-PEG concentration method;The effects of 4 methods of extracting RNA from NLVs in shellfish were compared;Detection of Norwalk-like viruses in commercial shellfish samples was performed,and positive samples were demonstrated by DNA sequencing.Results:This study conducted virus enrichment with pH 9.5 glycine buffer-16% polyethylene glycol(PEG) and RNA extraction with trizol-isopropanol.The recovery of viruses was 16.8% from seeded shellfish;and the detection limit was 8.1×102 RT-PCR50/5 g shellfish.NLVs in 3 of 25 samples were found by RT-PCR and validated by DNA sequencing.Conclusion:In this study,a NLVs detection method from shellfish is established,which is sensitive and available.

Key words: Norwalk-like viruses, RT-PCR, shellfish, detection

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