河豚毒素DNA适配子的制备及应用

doi:10.7506/spkx1002-6630-201424039

食品科学

河豚毒素DNA适配子的制备及应用

邵碧英，陈彬，陈文炳，杨方，缪婷玉，彭娟

福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，福建省检验检疫技术研究重点实验室，福建福州 350001

出版日期:2014-12-25 发布日期:2014-12-29
基金资助:
国家质检总局科研项目（2010IK145；2014IK104）

Preparation and Application of Tetrodotoxin DNA Aptamer

SHAO Bi-ying, CHEN Bin, CHEN Wen-bing, YANG Fang, MIAO Ting-yu, PENG Juan

Fujian Provincial Key Laboratory of Inspection and Quarantine Technology Research, Center of Inspection and Quarantine Technology,
Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China

Online:2014-12-25 Published:2014-12-29

摘要/Abstract

摘要：

人工合成78 个碱基的随机ssDNA文库，采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）结合的方法，通过筛选富集、克隆、测序，获得了与河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配子A3的二级结构主要为茎环结构，与TTX的亲和力为1.254。对适配子和TTX结合的磷酸盐缓冲液pH值、荧光染料结合时间进行优化，结果表明，最适pH值为7.5，最佳结合时间为10 min。建立的快速筛选检测TTX的DNA适配子-荧光染料法对TTX的检出限为10－6 mo1/L。

关键词: 河豚毒素, 适配子, 荧光染料, 检测

Abstract:

A 78-mer ssDNA library was synthesized in vitro. The tetrodotoxin (TTX) specific monoclonal DNA aptamer A3
was prepared using systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) combined with mutagenic PCR by
screening, enrichment, cloning and sequencing. The secondary structure of the DNA aptamer A3 mainly contained stem ring
structure, and the affinity for tetrodotoxin was 1.254. The PBS buffer pH and fluorochrome-binding time were optimized.
The results showed that the optimum pH was 7.5 and the best binding time was 10 min. As a result, a DNA aptamerfluorochrome
method for rapidly screening and detecting tetrodotoxin was developed with a detection limit of 10-6 mo1/L.

Key words: tetrodotoxin, aptamer, fluorochrome, detection

中图分类号:

邵碧英，陈彬，陈文炳，杨方，缪婷玉，彭娟. 河豚毒素DNA适配子的制备及应用[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201424039.

SHAO Bi-ying, CHEN Bin, CHEN Wen-bing, YANG Fang, MIAO Ting-yu, PENG Juan. Preparation and Application of Tetrodotoxin DNA Aptamer[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201424039.

[1]	田林双，顾鹏程，吴存兵，徐澳，豆雪梅，史凤珍，陈飞. 小麦粉及其制品中偶氮甲酰胺检测方法研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(9): 347-354.
[2]	李伊宁，黄昆仑，姚志轶. 用于叶酸检测的荧光传感器构建及应用研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(9): 214-221.
[3]	宁亚维，刘茁，杨正，马俊美，范素芳，李强，张岩. UPLC-MS/MS法同时检测食品中3种主要牛奶过敏原[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 270-276.
[4]	王玥，邵琳，李乾学，易乐，曲晗，王洪利，沈明浩. 适配体结合量子点技术同时检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7方法[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 305-312.
[5]	田景升，李东东，赵玲钰，高文惠. 喹乙醇印迹传感器的制备及其在喹噁啉类药物残留快检中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 316-324.
[6]	刘娜，曹强，肖雨诗，黄蓉，程雷，刘欢，韩刚，李晋成，李梦龙，吴立冬. 基于多巴胺及其衍生物的传感器在食品快速检测中的研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 332-339.
[7]	陈巧莉，杨兵，洪晴悦，魏鲟钰，方楚楚，阚建全. 海洋生物毒素的分类、毒害作用机制及检测技术研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 321-331.
[8]	赵非，陈宝英，李克峰，王旭. 高效液相色谱-荧光检测法测定红肉及其加工肉中唾液酸含量[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 313-318.
[9]	黄佳茵，周雅琪，陈美玉，李苑，吴甜甜，胡亚芹. 基于甲基纤维素改性聚乙烯醇指示膜的制备、表征及对南美白对虾的鲜度指示[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 194-203.
[10]	吴有雪，吴美娇，田亚晨，王政，郭亮，刘程，方水琴，刘箐. 沙门氏菌检测生物传感器研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 339-345.
[11]	付瑞杰，周静，田风玉，焦必宁，何悦. 基于纳米材料的光学适配体传感器在农药残留检测中的应用研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 330-338.
[12]	山珊，黄昭鸿，黄艳梅，刘道峰，刘成伟，黄运红，龙中儿. 不对称PCR技术结合免疫层析法快速检测产志贺毒素大肠埃希氏菌[J]. 食品科学, 2021, 42(2): 312-318.
[13]	山珊，黄艳梅，赵雪龙，陈文瑶，刘成伟，龙中儿，刘道峰. 级联信号转导系统结合免疫层析法检测大肠埃希氏菌O157:H7[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 314-320.
[14]	杨建飞，马倩，左勇，黄雪芹，徐佳，王定丽，周耀进，杨柯怡. 亚硝酸盐快速检测试剂研究及其在酱腌菜中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 321-328.
[15]	黄栋玮，谷贵章，胡科娜，高兴杰，张进杰，杨文鸽，徐大伦. 基于D152树脂吸附蛋白质结合SERS测定鱼肉中的鸟嘌呤含量[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 298-305.

河豚毒素DNA适配子的制备及应用

Preparation and Application of Tetrodotoxin DNA Aptamer

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价