β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌诱变选育及基因克隆表达

doi:10.7506/spkx1002-6630-201501034

食品科学

β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌诱变选育及基因克隆表达

陈计，高鹏，陆兆新，吕凤霞，张充，赵海珍，别小妹*

南京农业大学食品科技学院，江苏南京 210095

出版日期:2015-01-15 发布日期:2015-01-16

Breeding of High-Yield β-1,3-1,4-Glucanase-Producing Strain by Mutagenesis, and Cloning and Expression of β-1,3-1,4-Glucanase Gene

CHEN Ji, GAO Peng, LU Zhaoxin, LÜ Fengxia, ZHANG Chong, ZHAO Haizhen, BIE Xiaomei*

College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China

Online:2015-01-15 Published:2015-01-16

摘要/Abstract

摘要：

为获得β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌株，以高地芽孢杆菌YC-9为出发菌株，通过亚硝基胍（nitrosoguanidine，NTG）和低能N+束诱变育种，筛选和选育得到两株突变株N-2-2和10-30s-3，发酵培养60 h，酶活力分别达到28.6 U/mL和36.1 U/mL，分别是出发菌株的2.36 倍和2.98 倍，与YC-9菌株相比，突变菌株菌体生长下降但发酵产酶量增加。进一步将β-1,3-1,4-葡聚糖酶克隆并在大肠杆菌中成功表达，经过30 ℃诱导6 h后，胞内酶活力达79.2 U/mL，为出发菌株的6.5 倍。

关键词: 高地芽孢杆菌, &beta, -1, 3-1, 4-葡聚糖酶, 亚硝基胍诱变, 低能N+束注入, 异源表达

Abstract:

In order to obtain a high-yield β-1,3-1,4-glucanase producing strain, Bacillus altitudinis YC-9 was used as the
starting strain and mutagenized sequentially with nitrosoguanidine (NTG) and N+ beam. The preliminary and secondary
screening results showed that strain N-2-2 and 10-30s-3 had high ability to produce β-1,3-1,4-glucanase, with a yield of 28.6
and 36.1 U/mL, which revealed a 2.36- and 2.98-fold increase compared with that of the original strain, respectively, while
exhibiting reduced growth rates. Furthermore, the β-1,3-1,4-glucanase gene was successfully cloned and expressed in E. coli.
The intracellular activity was 79.2 U/mL, a 6.5-fold increase compared with the original strain, when induced at 30 ℃ for 6 h.

Key words: Bacillus altitudinis, β-1,3-1,4-glucanase, nitrosoguanidine (NTG) mutagenesis, N+ beam implantation, heterologous expression

中图分类号:

TS201.3

陈计，高鹏，陆兆新，吕凤霞，张充，赵海珍，别小妹*. β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌诱变选育及基因克隆表达[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201501034.

CHEN Ji, GAO Peng, LU Zhaoxin, Lü Fengxia, ZHANG Chong, ZHAO Haizhen, BIE Xiaomei*. Breeding of High-Yield β-1,3-1,4-Glucanase-Producing Strain by Mutagenesis, and Cloning and Expression of β-1,3-1,4-Glucanase Gene[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201501034.

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β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌诱变选育及基因克隆表达

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