基于CRISPR-Cas9系统的Saccharomyces cerevisiae基因删除

doi:10.7506/spkx1002-6630-20180125-317

食品科学 ›› 2019, Vol. 40 ›› Issue (6): 151-158.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20180125-317

基于CRISPR-Cas9系统的Saccharomyces cerevisiae基因删除

牛潇迪1，李天明1，刘金雷1，杨天勇1，李子怡2，冯惠勇1,*

1.河北科技大学生物科学与工程学院，河北石家庄 050018；2.马里兰大学帕克分校文理科学学院，美国马里兰 20742

出版日期:2019-03-25 发布日期:2019-04-02
基金资助:
“十二五”农村领域国家科技计划项目（2015BAD15B0501）

Gene Deletion in Saccharomyces cerevisiae Using CRISPR-Cas9 System

NIU Xiaodi1, LI Tianming1, LIU Jinlei1, YANG Tianyong1, LI Ziyi2, FENG Huiyong1,*

1. College of Biological Science and Engineering, Hebei University of Science and Technology, Shijiazhuang 050018, China; 2. College of Arts and Sciences, College Park, University of Maryland, Maryland 20742, USA

Online:2019-03-25 Published:2019-04-02

摘要/Abstract

摘要： 建立CRISPR-Cas9介导的在Saccharomyces cerevisiae双倍体细胞中进行基因敲除的方法。以can1基因敲除后的表型验证该CRISPR-Cas9系统的有效性，can1基因的失活效率达到4%。利用该系统又分别敲除了pdc、adh3、adh2、adh1、 pdh等基因，单基因编辑效率分别为4/48、3/48、1/48、3/28、1/16。确定了基因连续敲除的方法流程，pdc、adh3、adh2三个基因全部敲除，整个过程用时17 d。探索了双基因一次转化同时敲除的方法，将adh5、lip两个基因同时敲除用时6 d，基因编辑效率分别为9/32和10/32。

关键词: 酿酒酵母, CRISPR-Cas9, 基因组工程, 基因敲除

Abstract: In this study, CRISPR-Cas9-mediated gene knockout in diploid cells of Saccharomyces cerevisiae was investigated. The effectiveness of the CRISPR-Cas9 system was tested using the can1 knockout phenotype. The experimental results showed that the inactivation efficiency of can1 gene reached 4%. The pdc, adh3, adh2, adh1 and pdh genes were knocked out by this system, respectively, and the efficiency of gene editing was 4/48, 3/48, 1/48, 3/28 and 1/16, respectively. This study also developed a procedure for continuous gene knockout, and it took 17 days to knock out pdc, adh3, and adh2 using this procedure. It took 6 days to simultaneously disrupt adh5 and lip with 9/32 and 10/32 efficiencies, respectively.

Key words: Saccharomyces cerevisiae, CRISPR-Cas9, genome engineering, gene knockout

中图分类号:

Q789

牛潇迪，李天明，刘金雷，杨天勇，李子怡，冯惠勇. 基于CRISPR-Cas9系统的Saccharomyces cerevisiae基因删除[J]. 食品科学, 2019, 40(6): 151-158.

NIU Xiaodi, LI Tianming, LIU Jinlei, YANG Tianyong, LI Ziyi, FENG Huiyong. Gene Deletion in Saccharomyces cerevisiae Using CRISPR-Cas9 System[J]. FOOD SCIENCE, 2019, 40(6): 151-158.

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Gene Deletion in Saccharomyces cerevisiae Using CRISPR-Cas9 System

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