利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

doi:10.7506/spkx1002-6630-20180730-359

食品科学 ›› 2019, Vol. 40 ›› Issue (14): 123-129.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20180730-359

利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

谢雪琼，钟婵，孙乐常，翁凌，张凌晶，刘光明，曹敏杰

1.集美大学食品与生物工程学院，福建厦门 361021；2.水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心，福建厦门 361021

出版日期:2019-07-25 发布日期:2019-07-23
基金资助:
国家自然科学基金面上项目（31772049）

Preparation of Prolyl Endopeptidase Inhibitory Peptides from R-phycoerythrin Hydrolysate of Porphyra haitanensis

XIE Xueqiong, ZHONG Chan, SUN Lechang, WENG Ling, ZHANG Lingjing, LIU Guangming, CAO Minjie

1. College of Food and Biological Engineering, Jimei University, Xiamen 361021, China; 2. National & Local Joint Engineering Research Center of Processing Technology for Aquatic Products, Xiamen 361021, China

Online:2019-07-25 Published:2019-07-23

摘要/Abstract

摘要： 以坛紫菜（Porphyra haitanensis）为原料，通过硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等方法分离纯化得到一种高纯度藻红蛋白（R-phycoerythrin，R-PE）（A565 nm/A280 nm=5.4）。利用胃、肠液消化酶对R-PE进行酶解制备脯氨酰内肽酶（prolyl endopeptidase，PEP）抑制肽。酶解条件为：1）胃蛋白酶与R-PE比例0.5%（m/m），酶解时间30 min，pH 1.2，温度37 ℃；2）胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶质量比为1∶1的混合酶，其与R-PE比例0.25%（m/m），酶解时间30 min，pH 7.5，温度37 ℃。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析发现，经两步酶解，R-PE被完全降解。采用凝胶过滤色谱法测得R-PE水解液中分子质量在3 kDa以下的小肽含量为86.06%。R-PE水解液对PEP抑制水平IC50为136.35 μg/mL。酶抑制动力学研究发现，R-PE水解液对PEP表现为可逆的非竞争性抑制作用，抑制常数Ki为14 μg/mL。本研究利用坛紫菜R-PE制备活性高的PEP抑制肽，将为坛紫菜深加工及高值化利用提供一定的理论参考。

关键词: 坛紫菜, 藻红蛋白, 脯氨酰内肽酶抑制活性, 分子质量分布, 抑制动力学

Abstract: In this paper, R-phycoerythrin with relatively high purity (A565 nm/A280 nm = 5.4) was obtained from Porphyra haitanensis by ammonium sulfate fractionation and DEAE-Sepharose anion exchange chromatography. Prolyl endopeptidase (PEP) inhibitory peptides from R-phycoerythrin were prepared by two-step enzymatic digestion with gastrointestinal fluid proteases. Optimal hydrolysis conditions were determined as sequential hydrolysis with 0.5% pepsin at an enzyme-tosubstrate ratio of for 30 min at an initial pH of 1.2 and 37 ℃ followed by a 1:1 mixture of trypsin and chymotrypsin at an enzyme-to-substrate ratio of 0.25% for 30 min at pH 7.5 and 37 ℃. Tricine-SDS-PAGE showed that R-phycoerythrin was completely degraded by two-step enzymatic hydrolysis. Gel filtration chromatography analysis revealed that fractions with molecular mass lower than 3 kDa accounted for 86.06% of the total peptides. The half-maximum inhibitory concentration (IC50) of R-phycoerythrin hydrolysate toward PEP was 136.35 μg/mL. Inhibition kinetic study revealed that the hydrolysate acted as a noncompetitive inhibitor and the constant of inhibition (Ki) was 14 μg/mL. Successful preparation of R-phycoerythrin peptides with potential PEP inhibitory activity provides a theoretical rationale for the processing and utilization of P. haitanensis.

Key words: Porphyra haitanensis, R-phycoerythrin, PEP inhibitory activity, molecular mass distribution, inhibition kinetics

中图分类号:

TS254.1

谢雪琼，钟婵，孙乐常，翁凌，张凌晶，刘光明，曹敏杰. 利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽[J]. 食品科学, 2019, 40(14): 123-129.

XIE Xueqiong, ZHONG Chan, SUN Lechang, WENG Ling, ZHANG Lingjing, LIU Guangming, CAO Minjie. Preparation of Prolyl Endopeptidase Inhibitory Peptides from R-phycoerythrin Hydrolysate of Porphyra haitanensis[J]. FOOD SCIENCE, 2019, 40(14): 123-129.

[1]	曹荣，胡梦月，谭志军，王联珠，刘淇. 基于电子舌和气相色谱-离子迁移谱分析坛紫菜与条斑紫菜的风味特征[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 186-191.
[2]	赵凯，刘宁，李君，雷鸣，陈威，杨春华，陈凤莲. 表面糊化处理确定乙酰化羟丙基小麦淀粉中取代基团分布[J]. 食品科学, 2020, 41(7): 66-72.
[3]	谷春梅，尹佳玉，姜雷. 酶法提取对玉米皮阿拉伯木聚糖组成及分子质量分布的影响[J]. 食品科学, 2019, 40(6): 28-34.
[4]	陈丽花，朱楚楚，李冉冉. 体外消化对金瓜籽抗氧化肽抗氧化活性的影响[J]. 食品科学, 2019, 40(3): 78-86.
[5]	任海伟，石菊芬，蔡亚玲，范文广，姜启兴，李志忠，裴佳雯，王彦蕊. 响应面法优化超声辅助酶解制备藏系羊胎盘肽工艺及抗氧化能力分析[J]. 食品科学, 2019, 40(24): 265-273.
[6]	钟婵，谢雪琼，孙乐常，张凌晶，刘光明，曹敏杰. 蓝圆鲹骨骼肌内源性脯氨酸内肽酶抑制剂的纯化及其抑制机理[J]. 食品科学, 2019, 40(24): 15-20.
[7]	姜丽丽，张中民，陈道玉，王珍，薛宏宇，刘勇. 白藜芦醇对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学及抑制机制[J]. 食品科学, 2019, 40(11): 70-74.
[8]	郭兴峰，赵文婷，廖小军，胡小松，王晓，吴继红. 酸性条件下热处理对果胶流变和结构特性的影响[J]. 食品科学, 2018, 39(12): 40-46.
[9]	李锋，李清仙，程志远，郭养浩，石贤爱. 坛紫菜多酚抗氧化及抑制UVB致HSF细胞氧化损伤作用[J]. 食品科学, 2017, 38(17): 190-197.
[10]	邱娟，沈建东，翁凌，张凌晶，刘光明，曹敏杰. 利用牡蛎制备ACE抑制肽的工艺优化[J]. 食品科学, 2017, 38(16): 165-172.
[11]	宋悦，卓馨，陈娟娟，骆其君，杨锐，陈海敏，严小军. 不同胁迫温度条件下坛紫菜中脂肪酸和挥发性物质分析[J]. 食品科学, 2017, 38(10): 191-198.
[12]	谢飞,曹纯洁,陈美珍*,叶天文. 响应面试验优化末水坛紫菜多糖除蛋白工艺及其抗氧化活性[J]. 食品科学, 2016, 37(22): 77-84.
[13]	赵佳丽，徐盼盼，陈娟娟，骆其君，杨锐，陈海敏，严小军. 基于HPLC-QqQ-MS/MS技术的坛紫菜中植物激素分析[J]. 食品科学, 2016, 37(16): 216-222.
[14]	张慧，尹训兰，侯汉学，董海洲. 微波辐射对阳离子淀粉性质的影响[J]. 食品科学, 2016, 37(15): 118-123.
[15]	施瑛1，裴斐2，周玲玉1，杨方美3，胡秋辉3,*. 响应面法优化复合酶法提取紫菜藻红蛋白工艺[J]. 食品科学, 2015, 36(6): 51-57.

利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

Preparation of Prolyl Endopeptidase Inhibitory Peptides from R-phycoerythrin Hydrolysate of Porphyra haitanensis

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