沙门氏菌属随机扩增多态性DNA PCR条件的优化

doi:10.7506/spkx1002-6300-200920070

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (20): 320-323.doi: 10.7506/spkx1002-6300-200920070

沙门氏菌属随机扩增多态性DNA PCR条件的优化

粟婉媛¹，侯家奎²，柳婷¹，郭爱玲¹,*，王洪江¹，谢跻¹，马美湖¹

1.华中农业大学食品科学技术学院 2.许昌职业技术学院

收稿日期:2008-10-27 修回日期:2009-07-28 出版日期:2009-10-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 郭爱玲 E-mail:guoailing@mail.hzau.edu.cn
基金资助:
科技部农学教育学实验用微生物资源整合项目(2005DKA21208-6；2006DKA21208-6)

Optimization of RAPD PCR Assay for Salmonella Detection

SU Wan-yuan1，HOU Jia-kui2，LIU Ting1，GUO Ai-ling1,*，WANG Hong-jiang1，XIE Ji1，MA Mei-hu1

：TS201.31. College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070, China ；
2. Xuchang Vocational Technical College, Xuchang 461000, China

Received:2008-10-27 Revised:2009-07-28 Online:2009-10-15 Published:2010-12-29
Contact: GUO Ai-ling E-mail:guoailing@mail.hzau.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的：以5′-CCGAAGCTGC-3′为引物，利用随机引物扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA，RAPD)对沙门氏菌属的几种菌株进行扩增，以确定RAPD的最终优化条件。方法：首先选用25μl体系PCR和50μl体系PCR做对比，以确定进行RAPD实验最佳的PCR体系。其次进行PCR反应体系条件的优化，对PCR复性温度、引物浓度、Mg2+浓度进行条件优化。最后对初步确定的优化结果进行不同琼脂糖胶浓度梯度的优化以确定RAPD的最终优化条件。结果：RAPD优化条件为PCR复性32℃，25mmol/L Mg2+溶液体积2.0μl，10μmol/L引物体积0.2μl，琼脂糖胶浓度1.0%。结论：在优化条件下，以引物5′-CCGAAGCTGC-3′对沙门氏菌属的3种标准菌株，9株食品分离株进行扩增，得到的电泳条带最多，且最清晰。

关键词: 沙门氏菌, 地方菌株, 随机扩增多态性DNA, 优化

Abstract:

A random amplification of polymorphic DNA (RAPD)-PCR assay was developed for detecting Salmonella using a primer of 5′-CCGAAGCTGC-3′. In order to obtained distinctive and reliable results, the optimal PCR reaction conditions (namely PCR system volume, renaturation temperature, primer concentration and Mg2+ concentration) and agarose concentration for electrophoresis were investigated. Results showed that the optimal RAPD-PCR reaction was performed in a 25μl system containing 2.0μl of 25 mmol/L MgCl2 and 0.2 μl of primer at 32 ℃ and the optimal agarose concentration was 1.0%. Under such conditions, sufficient and clear electrophoresis strips were observed in RAPD-PCR detection of 3 typical Salmonella strains and 9 isolated Salmonella strains.

Key words: Salmonella, local strains, RAPD, optimization

中图分类号:

TS201.3

粟婉媛1，侯家奎2，柳婷1，郭爱玲1,*，王洪江1，谢跻1，马美湖1. 沙门氏菌属随机扩增多态性DNA PCR条件的优化[J]. 食品科学, 2009, 30(20): 320-323.

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