运用SYBR Green I荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒

doi:10.7506/spkx1002-6630-201014034

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (14): 153-157.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201014034

运用SYBR Green I荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒

莫雪梅¹，高东微^2,*

1.暨南大学药学院基因组药物研究所 2.广东检验检疫技术中心

收稿日期:2010-03-15 出版日期:2010-07-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 高东微 E-mail:margree@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(30872221)；广东省农业攻关科技计划项目(2005B20401017)；
广东出入境检验检疫局科技计划项目(2005AGDK28)

SYBR GreenⅠReal-time Polymerase Chain Reaction for the Detection of HAV in Strawberry

MO Xue-mei1， GAO Dong-wei 2,*

1. Institute of Genome Medicine, Pharmacy College, Jinan University, Guangzhou 510632, China ；
2. Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center, Guangzhou 510623, China

Received:2010-03-15 Online:2010-07-15 Published:2010-12-29
Contact: GAO Dong-wei E-mail:margree@126.com

摘要/Abstract

摘要：

针对甲肝病毒的vp3/vp1 壳蛋白区域设计引物，建立SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR 检测甲肝病毒的反应体系。此方法的病毒检测下限达到101 TCID50，标准曲线为Ct= － 3.052lg(TCID50)+34.57，线形范围101～105TCID50，相关系数0.9961。该方法对甲肝病毒检测特异，与轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒无交叉反应。针对甲肝病毒标准品检测的批内试验变异系数(CV)为0.85%～1.71%(n=5)、批间试验CV 为0.76%～1.98%(n=3)。运用此方法随机检测45 份草莓样品，检测出3 份阳性样品。该检测方法灵敏、特异、重复性好，可应用于水果和蔬菜中甲肝病毒的快速检测。

关键词: 甲肝病毒, SYBR Green I荧光RT-PCR, 检测, 草莓

Abstract:

A SYBR GreenⅠ real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) method using the primers designed to encompassing the conservative region of vp3/vp1 in the HAV was developed for the detection of HAV in strawberry. The limit of detection of the method was 101 TCID50. The standard curve was Ct = －3.052 lg(TCID50 )+ 34.57, displaying good linearity over a linear range from 101 to 105 TCID50 with 0.9961 correlation coefficient. This method was specific to HAV without any cross-reaction with rotavirus, adenovirus, norovirus or astrovirus. The coefficients of variation (CV) for determining HAV standards with different titers by this method were between 0.85% and 1.71% (n = 5) in intra-assay and between 0.76% and 1.98% (n = 3) in inter-assay. Totally 45 strawberry samples were examined, and 3 of them were found positive. This method is sensitive, specific and reliable, and can be used for the rapid detection of HAV in fruits and vegetables.

Key words: HAV, SYBR Green Ⅰ real-time RT-PCR, detection, strawberry

中图分类号:

莫雪梅1，高东微2,*. 运用SYBR Green I荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒[J]. 食品科学, 2010, 31(14): 153-157.

MO Xue-mei1， GAO Dong-wei 2,*. SYBR GreenⅠReal-time Polymerase Chain Reaction for the Detection of HAV in Strawberry[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(14): 153-157.

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运用SYBR Green I荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒

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