孔雀石绿人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

doi:10.7506/spkx1002-6630-201107061

食品科学 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (7 ): 282-285.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201107061

孔雀石绿人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

王梅¹，徐乃丰²，刘丽强²，匡华²，林菲²，宋珊珊²，王泽路²，胥传来^2,*

1.苏州大学分析测试中心 2.江南大学食品学院

收稿日期:2010-07-16 修回日期:2011-03-01 出版日期:2011-04-15 发布日期:2011-03-30
通讯作者: 胥传来 E-mail:xcl@jiangnan.edu.cn

Synthesis of Artificial Antigen and Preparation of Polyclonal Antibody for Malachite Green

WANG Mei1，XU Nai-feng2，LIU Li-qiang2，KUANG Hua2，LIN Fei2，SONG Shan-shan2，WANG Ze-lu2，XU Chuan-lai2,*

1. Analytical and Testing Center, Suzhou University, Suzhou 215123, China；
2. School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China

Received:2010-07-16 Revised:2011-03-01 Online:2011-04-15 Published:2011-03-30

摘要/Abstract

摘要： 通过研究孔雀石绿(MG)抗原的合成和多克隆抗体的制备，探索研究食品中孔雀石绿残留的检测方法。本实验先合成含有羧基的孔雀石绿半抗原(CMG)，并用液-质联用法进行分析鉴定。半抗原经重氮化法处理后分别偶联两种载体蛋白BSA和OVA，并通过紫外分光光度法进行鉴定。与CMG标准品和两种载体蛋白的紫外吸收光谱相比，偶联物的吸收峰发生了明显的偏移，计算得免疫原的偶联比为10.6:1，说明偶联成功。通过免疫制备多克隆抗体，并通过间接ELISA法对CMG抗血清的效价进行检测，并进一步检测抗体的特异性，两只兔子的IC50值分别为8.1ng/mL和4.6ng/mL。

关键词: 孔雀石绿, 人工抗原, 多克隆抗体, ELISA

Abstract: In order to determine malachite green (MG) residues in food, the synthesis of antigen and preparation of polyclonal antibody for MG were explored. In this study, carboxylic malachite green (CMG) hapten was first synthesized and analyzed by LC-MS. The hapten was coupled separately with the two carrier proteins BSA and OVA by diazotization method, and identified by UV-visible spectroscopy method. Compared with CMG standard, BSA and OVA, the absorption peaks CMG-BSA and CMG-OVA displayed a marked shift, indicating that the successful conjugation between CMG and BSA or OVA, and the coupling ratio of the immunogen CMG-BSA was calculated to be 10.6:1. Polyclonal antibody for MG was prepared by immunization with CMG-BSA and evaluated using the titer of anti-CMG antisera determined by indirect ELISA. Furthermore, two rabbits were used to evaluate antibody specificity with determined IC50 values of 8.1 ng/mL and 4.6 ng/mL, respectively.

Key words: malachite green (MG), antigen, polyclonal antibody, indirect ELISA

中图分类号:

R392.11

王梅，徐乃丰，刘丽强，匡华，林菲，宋珊珊，王泽路，胥传来. 孔雀石绿人工抗原的合成及多克隆抗体的制备[J]. 食品科学, 2011, 32(7 ): 282-285.

WANG Mei1，XU Nai-feng2，LIU Li-qiang2，KUANG Hua2，LIN Fei2，SONG Shan-shan2，WANG Ze-lu2，XU Chuan-lai2,*. Synthesis of Artificial Antigen and Preparation of Polyclonal Antibody for Malachite Green[J]. FOOD SCIENCE, 2011, 32(7 ): 282-285.

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