食品中三种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用

doi:10.7506/spkx1002-6630-201116050

食品科学 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (16): 236-239.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201116050

食品中三种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用

钱志伟1，孙新城2

1.河南农业职业学院食品科学系 2.郑州轻工业学院食品与生物工程学院

出版日期:2011-08-25 发布日期:2011-07-26
基金资助:
河南省科技厅重点攻关项目(102102310093)

Establishment and Application of a Multiplex PCR Assay for Detection of Three Pathogenic Bacteria in Food

QIAN Zhi-wei1，SUN Xin-cheng2

(1. Department of Food Science, Henan Vocational College of Agriculture, Zhengzhou 451450, China； 2. School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China)

Online:2011-08-25 Published:2011-07-26

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立同步速测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)方法。方法：利用基因组比对法寻找3种致病菌的特异性序列--沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和单增李斯特菌的prs基因，运用Primer Premier 5.0分别设计3对片段大小不同的特异性引物；通过优化反应体系，建立3种致病菌的多重PCR检测体系。结果：建立的多重PCR方法灵敏度测试结果分别为7.6、3.8、5.1pg/μL，在此灵敏度下可以扩增出全部特异性引物条带，验证性实验结果出现相应的目的条带且未发生交叉影响。结论：初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中沙门菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的三重PCR方法。

关键词: 食源性致病菌, 多重PCR, 沙门氏菌, 金黄色葡萄球菌, 单核细胞增生性李斯特菌, 食品检测

Abstract: Objective: To develop a rapid multiplex polymerase chain reaction (m-PCR) assay for simultaneous detection of Salmonella spp., Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes in food. Methods: The genomic alignment method was used to identify specific PCR target sequences. Three pairs of specific primers were designed with Primer Premier 5.0 according to the invasive protein gene (invA) of Salmonella, the nuc gene of Staphylococcus aureus and the prs gene of Listeria monocytogen. Multiplex PCR was established by optimizing the reaction system. Results: The sensitivity of the multiplex PCR method was 7.6 pg/μL for Salmonellla spp., 3.8 pg/μL for Staphylococcus aureus, and 5.1 pg/μL for Listeria monocytogenes. All specific primers were amplified, and their corresponding strips were observed in validation experiments without cross reactivity. Conclusions: A triple PCR assay has been established for the simultaneous, sample, rapid and sensitive detection of Salmonella spp., Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes in food.

Key words: food-borne pathogenic bacteria, multiplex polymerase chain reaction (m-PCR), Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Listeria monocytogen, food inspection

中图分类号:

TS207.4

钱志伟，孙新城. 食品中三种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用[J]. 食品科学, 2011, 32(16): 236-239.

QIAN Zhi-wei，SUN Xin-cheng. Establishment and Application of a Multiplex PCR Assay for Detection of Three Pathogenic Bacteria in Food[J]. FOOD SCIENCE, 2011, 32(16): 236-239.

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