双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

doi:10.7506/spkx1002-6630-201520039

食品科学

双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

许龙1，章英2，朱立鑫1，范艳1，赖肖2，孟玮1，胡娜1，刘仁荣1,*

1.江西科技师范大学生命科学学院，江西南昌 330013；2.南昌市疾病预防控制中心，江西南昌 330038

出版日期:2015-10-25 发布日期:2015-10-20
通讯作者: 刘仁荣
基金资助:
国家自然科学基金地区科学基金项目（81360429）；江西省高等学校科技落地计划项目（GJJ13573/13574）；
南昌市科技计划项目（洪财企[2012]，37号-23）

Preparation of Monoclonal Antibody for the Detection of Bisphenol A by Enzyme-Linked Immunoassay

XU Long1, ZHANG Ying2, ZHU Lixin1, FAN Yan1, LAI Xiao2, MENG Wei1, HU Na1, LIU Renrong1,*

1. College of Life Science, Jiangxi Science and Technology Normal University, Nanchang 330013, China;
2. Nanchang Center for Disease Control and Prevention, Nanchang 330038, China

Online:2015-10-25 Published:2015-10-20
Contact: LIU Renrong

摘要/Abstract

摘要：

采用活泼酯法将双酚A的结构类似物双酚酸与载体蛋白偶联制备人工抗原，用制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠，采用聚乙二醇法进行细胞融合制备双酚A单克隆抗体，成功获得一株分泌抗双酚A单克隆抗体的细胞株3H1，经鉴定抗体属于IgG1亚型，轻链为κ，并建立了间接竞争酶联免疫分析法。线性范围为1～50 ng/mL，最低检测限为0.43 ng/mL，半数抑制浓度为6.56 ng/mL。回收率为82.83%～101.94%，变异系数为2.94%～12.95%。该方法具有较高的灵敏度和特异性，具有良好的应用前景。

关键词: 双酚A, 单克隆抗体, 酶联免疫分析法

Abstract:

4,4-Bis (4-hydroxyphenyl) valeric acid (BVA), a derivative of bisphenol A (BPA), was chosen as the hapten to
prepare the artificial antigen. An active ester method was used for coupling BPA hapten with keyhole limpet hemocyanin
(KLH) and ovalbumin (OVA), respectively. BALB/c mice were immunized with the immune antigen to produce antibody.
After cell fusion with PE G method, the hybridoma cell lines generating anti-BPA monoclonal antibodies were obtained. The
monoclonal antibody was identified as IgG1 subtype with κ light chain. An indirect competitive enzyme-linked immunoassay
(ELISA) was set up using the monoclonal antibody. The linear range of the inhibition curve was between 1 and 50 ng/mL.
The limit of detection was 0.43 ng/mL, and the IC50 value was 6.56 ng/mL. The recovery rates of BPA in water ranged from
82.83% to 101.94% with variation coefficients of 2.94%–12.95%.The proposed immunoassay offers a great potential for
sensitive and specific detection of BPA in food safety monitoring.

Key words: bisphenol A, monoclonal antibody, enzyme-linked immunoassay

中图分类号:

TQ323.5

许龙，章英，朱立鑫，范艳，赖肖，孟玮，胡娜，刘仁荣. 双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201520039.

XU Long1, ZHANG Ying2, ZHU Lixin1, FAN Yan1, LAI Xiao2, MENG Wei1, HU Na1, LIU Renrong1,*. Preparation of Monoclonal Antibody for the Detection of Bisphenol A by Enzyme-Linked Immunoassay[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201520039.

[1]	王晓瑞，邱红玲，王寿利，朱海华，周莉，平洋，谭静，王永，王慧. 抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 319-325.
[2]	谭庶，杨金易，许吉华，沈玉栋，曾道平，苏晓娜，钟翠丽，许小炫，孙远明. 鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立[J]. 食品科学, 2020, 41(10): 304-310.
[3]	杨金泉，贺小敏，施敏芳，陈浩，李永蓉，朱友林. 固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定饮用水中双酚A和双酚S[J]. 食品科学, 2019, 40(20): 332-337.
[4]	王丽威，刘金，武俊瑞，乌日娜，岳喜庆. 抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 食品科学, 2019, 40(2): 110-116.
[5]	刘蓓蓓，曹林. 基于量子点建立铅镉快速串联检测方法[J]. 食品科学, 2019, 40(18): 335-341.
[6]	谢曼曼，李建武，王广彬，曾海娟，翟绪昭，丁承超，刘武康，刘箐. 副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定[J]. 食品科学, 2017, 38(8): 63-68.
[7]	李杰，丁承超，翟续昭，王广彬，刘武康，谢曼曼，曾海娟，王淑娟，孙静娟，董庆利，刘箐. 弧菌外膜蛋白OmpK单克隆抗体的制备及其特性[J]. 食品科学, 2017, 38(6): 111-116.
[8]	翟绪昭，曾海娟，王广彬，董庆利，谢曼曼，丁承超，刘武康，王淑娟，李杰，刘箐. 阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法[J]. 食品科学, 2017, 38(20): 268-272.
[9]	陈荫楠，陈华，石贤爱，叶小军，樊海平. 抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用[J]. 食品科学, 2016, 37(3): 151-157.
[10]	王亚楠，王晓斐，牛琳琳，雷壮，张海棠，王自良. 食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用[J]. 食品科学, 2016, 37(18): 152-158.
[11]	李妍，裴世春，王岩，高建伟，甄玉萍，马明欣，张品，谢铁志. ELISA和UPLC-MS/MS联合检测粮食中玉米赤霉烯酮残留[J]. 食品科学, 2016, 37(16): 229-234.
[12]	张帅，齐颖颖，张红星，王怡雯，谢远红，刘慧. 双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6 种血清型沙门氏菌[J]. 食品科学, 2016, 37(16): 211-215.
[13]	刘金，王丽威，岳喜庆. 牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立[J]. 食品科学, 2016, 37(14): 74-79.
[14]	王锋，王宇，王弘，肖治理. 杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的研究进展及其在食品安全检测中的应用[J]. 食品科学, 2016, 37(13): 251-256.
[15]	曾海娟，王广彬，郭慧琴，邱实，李建武，翟绪昭，丁承超，宋春美，刘箐. 抗瓜类细菌性果斑病菌单克隆抗体的制备及特性鉴定[J]. 食品科学, 2015, 36(23): 228-232.

双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

Preparation of Monoclonal Antibody for the Detection of Bisphenol A by Enzyme-Linked Immunoassay

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