水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立

doi:10.7506/spkx1002-6630-20190222-144

食品科学 ›› 2020, Vol. 41 ›› Issue (12): 305-311.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20190222-144

水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立

马丹，魏咏新，李丹，魏海燕，徐蕾蕊，汪琦，付溥博，张西萌，曾静

（北京海关技术中心，北京 100026）

出版日期:2020-06-25 发布日期:2020-06-22
基金资助:
“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFC1601602）；国家质量监督检验检疫总局科研项目（2017IK176）

Establishment of Droplet Digital PCR Assay for Quantitative Detection of Vibrio vulnificus in Aquatic Products

MA Dan, WEI Yongxin, LI Dan, WEI Haiyan, XU Leirui, WANG Qi, FU Pubo, ZHANG Ximeng, ZENG Jing

(Beijing Customs Testing Center, Beijing 100026, China)

Online:2020-06-25 Published:2020-06-22

摘要/Abstract

摘要： 选取创伤弧菌单拷贝基因met为靶基因，设计引物探针，建立对创伤弧菌准确定量的微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）方法，并进行特异性、灵敏度和重复性实验，同时与实时PCR（real-time PCR）方法进行比较。结果显示，所建立的ddPCR方法可以快速、高效地检测出创伤弧菌，细菌纯培养物中其定量限可达323 拷贝数/mL，检测限可达61 拷贝数/mL，人工污染牡蛎样品中能最低能检测到1.13×102 拷贝数/g的目标菌。对人工污染样品中目标菌的检测，ddPCR的定量结果约为平板计数结果的1.4 倍，比real-time PCR方法的检测更加稳定准确。本研究建立的ddPCR检测方法能快速准确、特异、灵敏地定量检测创伤弧菌。

关键词: 微滴数字聚合酶链式反应, 创伤弧菌, 实时荧光聚合酶链式反应

Abstract: This study aimed to establish a quantitative assay method to detect Vibrio vulnificus in aquatic products based on droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR). A pair of primers and probe were designed targeting the single-copy gene met in V. vulnificus. The specificity, sensitivity and repeatability of this method were tested through comparison with real-time PCR. The results indicated that the developed ddPCR method had good specificity, sensitivity and repeatability. In pure cultures, the limit of quantitation (LOQ) and limit of detection (LOD) of this method were 323 and 61 copies/mL, respectively. In artificially contaminated oyster samples, the sensitivity was 1.13 × 102 copies/g. The quantitative result of ddPCR was about 1.4 times as high as the plate counting result and was more stable and accurate than real-time PCR. Therefore, ddPCR is a rapid, specific and sensitive method for quantitative detection of V. vulnificus.

Key words: droplet digital polymerase chain reaction, Vibrio vulnificus, real-time quantitative polymerase chain reaction

中图分类号:

R155.5

马丹，魏咏新，李丹，魏海燕，徐蕾蕊，汪琦，付溥博，张西萌，曾静. 水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立[J]. 食品科学, 2020, 41(12): 305-311.

MA Dan, WEI Yongxin, LI Dan, WEI Haiyan, XU Leirui, WANG Qi, FU Pubo, ZHANG Ximeng, ZENG Jing. Establishment of Droplet Digital PCR Assay for Quantitative Detection of Vibrio vulnificus in Aquatic Products[J]. FOOD SCIENCE, 2020, 41(12): 305-311.

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