利用二维生物自显影技术快速检测追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分

食品科学 ›› 2008, Vol. 29 ›› Issue (2): 252-256.

利用二维生物自显影技术快速检测追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分

何佳, 赵启美, 陈钧

河南科技大学食品与生物工程学院；河南科技大学林学院；江苏大学药学院河南洛阳471003；河南洛阳471003；江苏镇江212013；

出版日期:2008-02-15 发布日期:2011-08-24

Study on Fast Detecting and Tracking of Antibacterial Active Components for Endophytic Fungi in Pseudolarix kaempferi Gord. with 2D-TLC Bioautography

HE Jia, ZHAO Qi-Mei, CHEN Jun

1.School of Food and Bioengineering, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China;2.School of Foresty, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China;3.College of Pharmacy, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China

Online:2008-02-15 Published:2011-08-24

摘要/Abstract

摘要： 目的:利用培养基覆盖二维薄层色谱生物自显影技术(2D-TLC bioautography)快速检测、追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分。方法:以二维薄层色谱将金钱松内生真菌代谢产物样品展开,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为指示菌,氯化三苯四氮唑(TTC)为显色剂,采用培养基覆盖生物自显影技术对其抗细菌活性成分进行检测、追踪。结果:该方法展开系统筛选简单,抑菌斑位置准确、斑点清晰,其优化条件为:以乙酸乙酯:正己烷(3:7)为弱极性展开系统,甲醇:二氯甲烷(1:9)为强极性展开系统,用20%甘油滤纸对湿室保湿,以14h菌龄的枯草芽孢杆菌为指示菌种子液,自显影薄层板36℃培养14～18h,1%TTC显色时间为1～2h,含0.2%～0.6%琼脂的半固体肉汤培养基应使用混菌法生物自显影,含1%琼脂半固体肉汤培养基应使用涂布法生物自显影。结论:培养基覆盖二维薄层色谱生物自显影技术是一种快速检测、追踪抗菌活性成分的方法,尤其适用于成分复杂的天然产物中抗菌成分研究。

关键词: 二维薄层色谱生物自显影, 金钱松, 内生真菌, 检测, 追踪, 抗菌活性成分

Abstract: Objective:To fast detect and track antibacterial active components for endophytic fungi in Pseudolarix kaempferi Gord. with agar overlay 2D-TLC bioautography. Method:The metabolites of endophytes fungus was developed with 2D-TLC, and antibacterial active components was detected and tracked by bioautography of Bacillus subtilis model and TTC coloration. Result:The results showed that the development system screening was easy, and antiblastic spot was accurate and limpid. Optimization technology was acetidin:N-hexane(3:7)as low-pole solvent system, methanol:dichloromethane(1:9) as polar solvent system, 20% glycerol filter paper as moisturizer, 14 h age Bacillus subtilis as indicating strain seed on thin layer plate cultivated for 14～18 h, 1% TTC staining time 1～2 h, bacterial mix method suitable to 0.2%～0.6% agar semisolid bouillon culture-medium, bacterial spread method suitable to 1% agar semisolid bouillon culture-medium. Conclusion:Agar overlay 2D-TLC bioautography is a fast mothod for detecting and tracking of antibacterial active components, and it is especially suitable to complicated natural product.

Key words: 2D-TLC-bioautography, Pseudolarix kaempferi Gord, endophyte, detection, track, antibacterial ac-tive components

何佳, 赵启美, 陈钧. 利用二维生物自显影技术快速检测追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分[J]. 食品科学, 2008, 29(2): 252-256.

HE Jia, ZHAO Qi-Mei, CHEN Jun. Study on Fast Detecting and Tracking of Antibacterial Active Components for Endophytic Fungi in Pseudolarix kaempferi Gord. with 2D-TLC Bioautography[J]. FOOD SCIENCE, 2008, 29(2): 252-256.

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