赭曲霉毒素A纳米抗体制备与抗体特性分析

doi:10.7506/spkx1002-6630-20250923-188

食品科学 ›› 2026, Vol. 47 ›› Issue (6): 175-181.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20250923-188

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赭曲霉毒素A纳米抗体制备与抗体特性分析

徐睿君，方振华，王琴，刘洋

（1.新疆第二医学院，新疆克拉玛依 834000；2.克拉玛依绿成农业开发有限责任公司，新疆克拉玛依 834000）

发布日期:2026-04-14
基金资助:
新疆克拉玛依重点研发计划项目（2023）；新疆第二医学院校级科研创新团队项目（KT202402）；新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目（2022D01A48）；新疆克拉玛依骨干科技创新人才计划项目（2023）

Preparation and Characterization of Nanobodies against Ochratoxin A

XU Ruijun, FANG Zhenhua, WANG Qin, LIU Yang

(1. Xinjiang Second Medical College, Karamay 834000, China; 2. Karamay Lvcheng Agriculture Co., Ltd., Karamay 834000, China)

Published:2026-04-14

摘要/Abstract

摘要： 为获得高亲和力的赭曲霉毒素A（ochratoxin A，OTA）纳米抗体，本研究利用pET22b-OTA重组表达系统，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导及周质纯化制备纳米抗体，并对抗体的特性进行探究，通过分子对接分析纳米抗体与毒素结合的关键氨基酸位点。结果表明，成功制备了分子质量约14 kDa的OTA纳米抗体。该抗体半数抑制浓度达1.040 ng/mL，对黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1等霉菌毒素交叉反应率均小于30%，在25～95 ℃、pH 7.4、离子浓度25 mmol/L条件下及体积分数10%～80%甲醇溶液、丙酮溶液中保持稳定。分子对接结果证实，LYS45、GLU48等氨基酸残基通过氢键、π-π堆积及静电相互作用介导高亲和力结合。本研究成功制备了高亲和力的OTA纳米抗体，可为食品安全检测提供高性能分子工具，对保障食品安全具有现实应用价值。

关键词: 赭曲霉毒素A；纳米抗体；抗体特性；分子对接

Abstract: To obtain high-affinity anti-ochratoxin A (OTA) nanobodies, the pET22b-OTA recombinant expression system was utilized to prepare nanobodies through isopropyl-β-D-thiogalactoside (IPTG) induction and periplasmic purification, and the obtained antibody was characterized. Molecular docking was used to analyze the key amino acid sites for the binding of the antibody to the toxin. The results showed that molecular mass of the nanobody was approximately 14 kDa. Its half maximal inhibitory concentration (IC50) value was 1.040 ng/mL, and its cross-reaction rates with the mycotoxins aflatoxin B1 (AFB1) and aflatoxin M1 (AFM1) were both below 30%. The antibody remained stable at 25 to 95 ℃, at pH 7.4, at an ion concentration of 25 mmol/L, in 10% to 80% methanol solutions, and in acetone solutions. Molecular docking results confirmed that amino acid residues such as LYS45 and GLU48 mediated high-affinity binding through hydrogen bonds, π-π stacking, and electrostatic interactions. The high-affinity anti-OTA nanobody provides a high-performance molecular tool for food safety detection, demonstrating significant application value for ensuring food safety.

Key words: ochratoxin A; nanobody; antibody characteristics; molecular docking

中图分类号:

R392.1

徐睿君，方振华，王琴，刘洋. 赭曲霉毒素A纳米抗体制备与抗体特性分析[J]. 食品科学, 2026, 47(6): 175-181.

XU Ruijun, FANG Zhenhua, WANG Qin, LIU Yang. Preparation and Characterization of Nanobodies against Ochratoxin A[J]. FOOD SCIENCE, 2026, 47(6): 175-181.

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